生物玻片标本制作技术（一）
一般分装片、涂片和切片三类。
装片：某些原生动物、水螅、微小的昆虫整体、昆虫器官、植物的叶表皮、单胞藻类等
涂片：血液、精液、细菌、寄生虫卵等
切片：博物馆植物的大块组织
一、取材用最锋利的刀或刀片从有关部位切取一小块放在固定液中固定
动物组织的切块，厚度不超过3毫米，体积不大于1.5*1.5*0.5厘米;
植物组织，细的根、茎、窄的叶片，可切取3~5毫米长的小段；粗的根、茎、宽的叶片，也可切取一部分固定
选择部位：
植物细胞有丝分裂，多选择冰葱等的根尖。分裂快，便于切取，容易制作
植物细胞减数分裂，采集花药
动物染色体切片，动物睾丸或取果蝇幼虫的唾液腺
二、固定
（一）基本原则
将组织浸泡在化学试剂，保持原有形态结构，使材料硬化
组织较大或组织致密的材料，选择穿透力强的固定液
一般pH值较大的固定液，可增强染色能力：酒精、升汞、福尔马林、重铬酸钾等
pH值较小的固定液，如铬酸、苦味酸等，染色能力较弱
许多酸性固定液可使核质和线粒体溶解，但能保存染色体、核仁和纺锤丝
一些碱性固定液能溶解某些材料的染色质和纺锤丝，但核仁、线粒体可被保存
固定液的量至少为材料的20~30倍
有些水分较多的组织，可换1~2次新液
有些含较多的空气可用抽气的方法使其下沉
材料固定后可在70%酒精内保存
（二）固定剂：
1 甲醛（福尔马林）
能与蛋白质形成复合物
穿透力不如醋酸和酒精强，但比其它固定剂好
使组织硬化，但不如酒精收缩强烈；有的组织会稍膨胀，与酒精混合，固定效果更好
利于细胞核染色，特别是对动物组织固定更佳
2 酒精（乙醇）
50%以上浓度对组织有固定作用
高浓度酒精会使组织大量脱水，脱脂及破坏和溶解一些色素
对蛋白质有较强的凝固作用和很大的脱水凝固作用和很大的脱水能力
酒精固定的组织，很容易收缩硬化
穿透力较强，可缩短固定时间
3 升汞（氯化汞、氯化高汞）
毒性很强，穿透力仅次于醋酸
几乎可沉淀所有的蛋白质，对类脂质无固定作用
对组织硬化作用不强
需要作脱汞处理
4 锇酸（四氧化锇）
保存原生质最优良试剂，也是脂肪和类脂质唯一固定剂
对线粒体、高尔奉复合体均有很好的效果
锇酸蒸汽对游走子、精子 、孢子、单胞藻及一些原生动物等也具有良好固定作用
穿透力很弱，要求组织块小
固定的时间，组织变成暗棕色，取出用水洗涤（洗涤前先用3~5%过氧化氢漂白）
5 醋酸（冰醋酸）
穿透力极强，5%醋酸水溶液短时间内具有固定作用
透过性强
可沉淀核蛋白，对染色质思想家较好
不会使组织硬化甚至有些膨软
固定后投入50~70%酒精洗涤
6 重铬酸钾
单用固定浓度为0.5~2%水溶液
与醋酸混合，pH>4.6，固定染色体，及对细胞质和染色体产生网状沉淀作用
不与醋酸混合，pH>5.2，对类脂质有固定作用，可固定高尔基复合体、线粒体
一般不收缩，有的稍膨胀，酒精处理后继续收缩
固定后用水充分洗涤，最好选用酸性染料染色
7 铬酸
用0.5~2%浓度，与醋酸混合效果极好
穿透慢，固定液量十分充足
几乎可沉淀一切蛋白质，是细胞核、细胞质的优良固定剂
有不同程度的硬化，特别是对植物组织更脆硬
固定后组织常呈棕黄色，用1%高锰酸钾水溶液对切片漂白1分钟，再用5%草酸水溶液处理、水洗，将组织中的铬酸完全除净
8 苦味酸（三硝基酚）
穿透慢，有良好固定作用
能沉淀细胞质、核蛋白和核酸
固定后对组织有较大收缩但硬化不大
固定后用70%酒精洗去黄色
（三）固定液
1 单纯固定液：
（1）10%甲醛（福尔马林）、50%酒精（乙醇）至无水酒精、 1~2%锇酸（四氧化锇）
1）10%甲醛水溶液：甲醛水溶液10毫升，自来水或蒸馏水90毫升
2）10%甲醛生理盐水溶液：甲醛水溶液10毫升，自来水或蒸馏水90毫升，氯化钠0.85~0.9克
3）10%甲醛缓冲液：甲醛水溶液10毫升，自来水或蒸馏水90毫升，磷酸二氢钾，磷酸氢氢二钠
4）1~2%锇酸水溶液：锇酸1~2克，蒸馏水100毫升
5）80~100%酒精溶液：95%酒精84.2毫升加蒸馏水至100毫升
6）甲醛钙:甲醛，蒸馏水90毫升，甲醛10毫升，醋酸钙1克
2 混合固定液：
（1）酒精甲醛液（AF）：95%或无水酒精酒精90毫升、甲醛10毫升
（2）酒精甲醛醋酸（FAA，AFA）：甲醛5毫升、59%或70%酒精90毫升、冰醋酸5毫升。薄嫩组织用50%酒精，硬厚组织用70%酒精。大块而致密的组织增加醋酸量而减少甲醛量。用于一般植物组织固定（5~20小时），固定后从70%酒精开始脱水
（3）Zenker液：重铬酸钾2.5克、升汞5克、硫酸钠1克、蒸馏水100毫升、冰醋酸5毫升
对动物细胞质、细胞核固定效果甚佳并利于染色。固定18~24小时，水洗12小时除去重铬酸钾 70%酒精时加少许碘酒脱汞
（4）Bouin液：苦味酸饱和水溶液75毫升、甲醛水溶液25毫升、冰醋酸5毫升
Helly液：重铬酸钾2.5克、升汞5克、蒸馏水100毫升、甲醛5毫升
（5）Carnoy液：无水酒精3份、冰醋酸1份，或无水酒精6份、氯仿3份、冰醋酸1份。可固定细胞质和细胞核；固定花粉母细胞、胚胎及染色体效果良好。薄组织1~2小时；大块致密的组织6~12小时。固定后用无水酒精脱水
（6）Gilson液：95%酒精42毫升、浓硝酸2毫升、醋酸18毫升、升汞饱和水溶液11毫升，蒸馏水60毫升；或升汞2克，蒸馏水88毫升，60%酒精10毫升，80%硝酸1.5毫升,冰醋酸0.4毫升。优良动物组织固定液。一般组织固定4~6小时，小动物时间更短。固定后用50%酒精洗涤,脱水至70%酒精时加碘酒脱汞。
（7）Schaudin液：无水酒精50毫升、升汞饱和水溶液100毫升
（8）Nawashin液：1%铬酸100毫升、福尔马林40毫升、冰醋酸10毫升
（9）田原氏液：铬酸海水溶液70毫升，过滤海水30毫升，2%锇酸5毫升，冰醋酸2.5毫升
铬酸海水溶液：铬酸饱和水溶液2毫升加在过滤海水98毫升，充分搅拌
适于各种海藻固定，时间4~7小时，用水洗涤
（10)Ruttle改良液
配方一：
A液：铬酸1克，冰醋酸10毫升，蒸馏水90毫升
B液：福尔马林40毫升，蒸馏水19毫升
用时两液等量混合
配方二：用时配制
1%铬酸30毫升，10%醋酸20毫升，福尔马林10毫升，蒸馏水40毫升
（11）Strasburger液
铬酸0.7克，冰醋酸0.5克，蒸馏水100毫升
适于藻类、藓类等固定24小时
（12）Bouin改良液
配方一：
1%铬酸50毫升，10%醋酸20毫升，苦味酸饱和水溶液20毫升，福尔马林10变长
配方二：
1%铬酸50毫升，冰醋酸5毫升，苦味酸饱和水溶液35毫升，福尔马林10毫升
适用于一般植物组织、茶座母细胞、胚囊细胞及动物的一些柔软组织
穿透力很强，固定速度快。薄软的组织1~3小时；较大的组织12~24小时
固定后用50%酒精洗涤，从70%酒精开始脱水
（13）Flemming液
| 试剂 |
改良液一 |
改良液二 |
| 10%铬酸水溶液 | 3.1毫升 | 1.5毫升 |
| 10%醋酸水溶液 | 3毫升 | 1毫升 |
| 2%锇酸的铬酸（2%）水溶液） | 12毫升 | 5毫升 |
| 蒸馏水 | 11.9毫升 | 96.5毫升 |
适于植物组织固定。固定24~48小时。固定后流水冲洗。固定的组织呈黑色，染色前在2~3%过氧化氢数小时
（四）固定后处理
1 流水洗涤：适于一般组织。用自来水或高悬水箱的水流冲洗。也可用清水浸泡嵯换洗数次。流水冲洗时，把组织放在广口瓶或烧杯里，口扎纱布，直接放在水龙头下冲洗，用水龙头上接一截橡皮管，将管插入瓶底或器皿底部，缓慢或快速冲洗，数小时至12~24小时。冲净固定液 。
2 酒精洗涤：Bouin液固定的组织用70~80%酒精洗涤至浅黄色至无色。经常换酒精。
3 脱汞：含升汞固定的组织，脱水至70%酒精加少量碘酒至棕色变成浅色为止，最后用加5%硫代硫酸钠水溶液 去碘。
4 脱钙：如骨。用硝酸、盐酸、三氯醋酸、EDTA等脱汞。
三、脱水
多用酒精，一般从30%酒精开始，经50%、70%、80%、90%、95%至无水酒精
对于脆弱薄嫩的组织，如植物嫩芽、嫩叶及部分藻类，可从15%或20%酒精开始，级差10%。酒精体积不少于组织的20~30倍。
四、透明
无水酒精-透明剂（甲苯、二甲苯、氯仿等）1：1浸1~2小时，再转入纯透明剂透明，透明至组织大体呈明亮（约1~8小时）。
透明剂出现白色雾状，说明组织含水 。需重新脱水再透明。
五、浸蜡
先经42~45℃石蜡，再经52~55℃石蜡，蜡温比蜡熔点高3℃，使石蜡呈液态。
时间1.5~3小时。
六、包埋
切面朝下。组织居中。选用合适包埋底模（大于组织2毫米）。
七、切片
开始切时，蜡内无组织。切至一定数量时，才看到组织。用毛笔对切下的蜡片随切片延长进行拖接，至一定长度，将蜡带折断。用毛笔轻轻拖放在洁净的纸上。
蜡片卷曲而不形成蜡带：
蜡块过硬：加除了切片速度、在较高温度下作业、将蜡块用热水（低于熔点）温热后再切切片刀（片）角度不妥：重新调角度
蜡片过厚且切片速度太慢：调节厚度、加快切片速度
刀刃不够锋利：换切片或移动刀片位置
蜡带弯曲不直：
蜡块左右两边长度不等：年尊修切蜡边
刀刃锐利不匀：移动刀片的位置
刀刃与蜡块下边为平行：调整蜡块位置
组织未处于蜡块中央：年尊修切
八、粘片
40~50℃温水
九、染色
（一）染液
1.苏木精
（1）Delafield苏木精：
苏木精（Hematoxylin）1克，95%酒精25毫升，铵明矾饱和水溶液40毫升，甲醇100毫升，甘油100毫升
先将苏木精加在酒精中，溶解后与铵明矾水溶液混合，置阳光下约1星期，过滤，加入甲醇和甘油。继续放置1~2月至呈深暗色，过滤。用时以蒸馏水适当稀释。对动植物组织均可用。染色数分钟至 数小时，用水洗5~10分钟，50%酒精洗1分钟，用0.5~1%盐酸酒精（70%）分色。
（2）Harris苏木精：
苏木精1克，无水酒精10毫升，明矾20克，蒸馏水200毫升
先将苏木精溶于酒精，将明矾溶于蒸馏水。两液混合。在烧杯中加热煮沸，加氧化汞0.5克，溶细胞素至暗紫色，移入冷水冷却，过滤，加醋酸0.5~1毫升，备用。
（3）Mayer铝苏木精：
苏木精0.1克，蒸馏水100毫升，碘酸钠0.02克，明矾5克
先将苏木精溶于蒸馏水，加碘酸钠和明矾，充分搅拌，溶解后过滤。
染色3~5分钟。用染则用0.1%盐酸分色。
（4）Ehrlich苏木精
苏木精2克，无水酒精100毫升，醋酸10毫升，甘油100毫升，明矾过量，蒸馏水100毫升
先将苏木精溶于无水酒精，加醋酸，混合后加蒸馏水和甘油，再加明矾至饱和为止。最后在空气中3~4周，过滤备用。
密封后可长期保存，时间越久，染色效果越好。染5~10分钟。染后直接入70%酒精脱水。
可与伊红、橙黄G、番红进行双重染色。木本植物茎组织应先染番红再染苏木精
（5）Heidenhain铁苏木精
苏木精0.5克，95%酒精10毫升，蒸馏水90毫升
将苏木精加酒精中溶解，再加蒸馏水，配成0.5%苏木精溶液，放置5~6星期成熟。用时加等量蒸馏水稀释。
染色前，先在2.5%铁明矾水溶液媒染2~6小时，水冲洗数分钟，然后染色4~12小时，水洗，用2.5%铁明矾水溶液分色，镜检，用水冲洗5~10分钟 ，再与其它酸性染液染色。
（6）Weigert苏木精液
30%三氯化铁水溶液 4毫升，苏木精1克，95%酒精190毫升，蒸馏水96毫升
先将苏木精溶于酒精100毫升，成熟后取10毫升与酒精10毫升混合。将三氯化铁水溶液4毫升加蒸馏水，单独保存。用时与酒精溶液混合。
适于脑、脊髓等神经组织染色，其它组织或部分单细胞失物也可使用。
（7）Mallory磷钨酸苏木精液
苏木精0.1克，蒸馏水80毫升，10%磷钨酸水溶液20毫升，过氧化氢0.2毫升
先将苏木精溶于蒸馏水，与磷钨酸混合，最后加过氧化氢，1~2周后使用。
可染结缔组织、肌组织和神经元等。染色前 用 水略洗切片，然后染色2~24小时，水洗。
（8）Mallory磷钼酸苏木精液
苏木精1克，蒸馏水100毫升，10%磷 钼酸水溶液10毫升，水合三氯乙醛5~10克
先将苏木精溶于蒸馏水；与磷钼酸混合，再加三氯乙醛，置阳光下7~10天，过滤，
最适于脑、脊髓等神经组织染色，染色15~60分钟，以30~40%酒精洗涤。
（9）Hansen苏木精液
苏木精1克，无水酒精100毫升，10%钾明矾水溶液200毫升,6%高锰酸钾水溶液17毫升
先将苏木精溶于无水酒精,加入钾明矾水溶液,充分混合,加高锰酸钾水溶液,如有沉淀,过滤。
染一般组织5~15分钟 。可用伊红复染。
2.卡红
（1）硼砂卡红液
卡红（洋红）3克，70%酒精100毫升，硼砂4克，蒸馏水 100毫升
先将卡红溶于酒精，硼砂溶于蒸馏水。两液混合 ，加热至沸腾，放置冷却，1~2天后过滤使用
可染细胞核和胚胎组织及一些小动物的整体一条虫节片。一般染色30~60分钟 ；小动物整体 2~12小时；绦虫节片至少24小时，加温（37~42C）可缩短时间。染色后用50%酒精轻洗。过染用盐酸酒精（70%酒精100毫升加盐酸 0.25毫升）分色
（2）苦味酸卡红液
卡红1克，苦味酸饱和水溶液50毫升，氨水1毫升，蒸馏水50毫升
先将卡红溶于蒸馏水，加氨水，边加边搅拌，最后加苦味酸，2~3天后过滤，取滤液使用
可将细胞质染成红色。染色10~15分钟 ，水洗。过染用盐酸酒精分色
（3）醋酸卡红液
45%醋酸水溶液100毫升加卡红至饱和，加热、搅拌、过滤，取滤液使用
核染色剂，可染染色体。适于临时制片；长久保存，则用时加氯化铁（45%）醋酸饱和水溶液染色
（4）铵明矾卡红液
卡红酸（洋红酸）1克，铵明矾10克，蒸馏水200毫升
将铵明矾研细,与卡红酸五起放到蒸馏水里,加热,搅拌,溶后过滤。滤液加水杨酸钠0.5克防腐。
把切片从蒸馏水中取出，染15~20分钟，水洗5分钟；过染则用5%铵明矾水溶液分色数秒钟，蒸馏水速洗。
一般组织外染色，也适于整体染色。如染细胞，染后水洗，如染细胞核，用5~10%铵明矾水溶液分色，蒸馏水略洗。
（5）钾明矾卡红液：
卡红 1克，钾明矾12克，蒸馏水160毫升
将钾明矾研细，放在蒸馏水煮沸。加入卡红，边加边搅拌，继续煮沸10~15分钟，静置冷却，倾去上层浮沫。加全量1.2蒸馏水，再煮沸15~20分钟，冷却后再 倾去浮沫，最后过滤，加少许麝香 草酚防腐，放置蒸发，至100毫升时，用于染色
最适于小型整体材料染色（1~2天，水洗20~30分钟）；也可用于一般切片染色（15~20分钟山清水秀洗2~3分钟）
（6）碳酸锂卡红液
卡红2.5克，碳酸锂饱和水溶液100毫升
充分搅拌，加热至卡红完全溶解，静置冷却，过滤，取滤液使用
一般切片染20~30分钟，染后用酸酒精分色20~30分钟，镜下检查。
染细胞核，分色延长数小时，用蒸馏水冲洗。
3.番红(Safranin O)
可染细胞质和细胞核，是动植物组织最重要的核染色。
还可染木质和角质化的组织，对核分裂染色体的染色及花粉和孢子染色效果良好。
在动物组织，常用来染尼氏体。在植物组织染色中常与固绿作对比染色。
一般配制：
番红1克，苯胺水90毫升，95%酒精10毫升
将番红在酒精中溶解，加苯胺水充分混合。
苯胺水：苯胺油3毫升，蒸馏水80毫升
Flemming三重染色
第一液：番红1克，95%酒精100毫升
第二 液：番红1克，蒸馏水100毫升
充分混合，过滤。滤液约等于1%的50%酒精溶液 。
番红最适于Flemming液固定的组织。染色2~24小时，水洗或50%酒精洗涤，
番红易溶于水和酒精，染色时间长些
4.碱性品红或碱性复红或复红（Basic fuchsim 或Fuchsim）
最强的细胞核染料，对黏液、弹性纤维、轮藻、原球藻及细菌染色效果良好。
可溶于水和酒精
（1）水溶性品红 液：碱性品红1克，蒸馏水100毫升
染黏液、细胞核、弹性纤维、细菌等，染色10~20分钟，水洗。
（2）雷锁辛（对苯二酚）复红液：
碱性品红1克溶于蒸馏水100毫升，加雷锁辛2克，先在蒸发皿中加热煮沸，加30%氯化铁水溶液13毫升，继续煮沸片刻，冷却过滤。
取沉淀物于三角烧瓶内，加95%酒精100毫升，在水浴锅内加热溶解，冷后过滤。
取滤液加25%盐酸2毫升，最后加等量95%酒精稀释，保存备用。
可与铵明矾卡红液对比染色，染色15~20分钟，用95%酒精分色。
（3）Loffler饱和复红水溶液
饱和碱性品红水溶液1毫升，单宁酸1克，蒸馏水10毫升，硫酸铁饱和水溶液5毫升
先将单宁酸溶于蒸馏水；与碱性品红液、硫酸铁饱和液充分混合。静置数日过滤使用。
可与染抗酸杆菌，与Loffler美蓝液对比染色，抗酸菌呈红色，其它菌蓝色。
（4）Z iehl石炭酸品红液：
碱性品红1克，95%酒精10毫升，5%石炭酸水溶液100毫升
先将碱性品红溶于酒精，与石炭酸液混合，充分搅拌。
与Loffer品红液相同，用于抗酸菌染色。
5.俾士麦褐或棕（Bismarck brown）
俾士麦褐（棕）1克，蒸馏水40毫升，95%酒精60毫升
先将俾士麦褐溶于蒸馏水，加入酒精，充分搅拌，加温，冷却，再搅拌，再加温，冷却，反复多次，直到再不溶解为止，最后过滤。取滤液加少量石炭酸。
可染植物纤维和细胞核。
植物组织用龙胆紫染色，再用俾士麦棕染色，木化组织、木栓组织染成紫色，纤维组织呈褐色。染色10~15分钟，用50%酒精分色。
6.中性红（Neutral red)
弱碱性染料，常配成1%水溶液保存备用。
可用于细胞质的活体染色和原生生物的活体染色，0.01%以下的水溶液可用于液泡的活体染色。
动物活体染色用0.00001~0.00002%生理盐水溶液。
也用于一般植物组织切片和神经元尼氏体染色。
7.结晶紫（Crystal violet）
溶于水和酒精
Flemming法、三重染色用 1%水溶液
一般用法：结晶紫7克溶于无水酒精或95%酒精100毫升，用时取10毫升加苯胺水100毫升，
用于动植物和微生物。革兰氏染色法中以结晶紫作为细菌的鉴别染色：先用结晶紫苯胺水稀释液染2分钟-碘液（碘1克，碘化钾2克，蒸馏水300毫升）1分钟，无水酒精1分钟。
8.美蓝（次甲基蓝、甲烯蓝、亚甲基蓝，Methylene blue)
用固定液固定的组织切片染色，美蓝必须成熟。配后长期放置或适当加入碱性溶液可使其成熟。
可用于神经组织和核仁活体染色。美蓝-伊红液可染各种血细胞。
一般动物组织染色，常用1%水溶液，染2~12小时，水洗，不用分色。
美蓝也用于细菌染色，
（1）Loffler美蓝液：美蓝饱和无水酒精液30毫升与0.1%氢氧化钾水溶液100毫升混合。用于抗酸菌染色和细菌染色。
（2）Kuehne石炭酸美蓝液：
美蓝1.5克，石炭酸5克，无水酒精10毫升，蒸馏水100毫升
先将美蓝和石炭酸溶于蒸馏水，再加入无水酒精。用于一般细菌染色。
美蓝氯化钠饱和液（美蓝1克溶于1.5~2.5%氯化钠水溶液），可用于海产无脊椎动物染色。
9.甲基绿（烷绿，Methyl green)
较常用细胞核染料。细胞核、染色体呈绿色。溶于酒精或水，其溶液常加少量醋酸，增强着色能力。
甲基绿3克，蒸馏水或70%酒精100毫升，醋酸1毫升
水溶液染12~24小时，酒精溶液染6小时以上。
甲基绿水溶液染草履虫等原生动物效果良好。
10.甲苯胺蓝（Toluidine blue)
甲苯胺蓝0.5~1克溶于蒸馏水100毫升
染一般动物组织和神经细胞的尼氏体及无脊椎动物的神经组织。
染一般动物组织：1%钼酸铵水溶液媒染5~10分钟；再入甲苯胺蓝水溶液温染3~5分钟；钼酸铵水溶液分色1~3分钟，水洗。
一些无脊椎动物组织切片：脱蜡入水；1%钼酸铵水溶液媒染5分钟，水洗1分钟；甲苯胺蓝水溶液染5~10分钟，蒸馏水洗去浮色。
11.亮绿（Light green）
酸性染料，溶于水和酒精
1%亮绿水溶液：亮绿1克，蒸馏水100毫升
1%亮绿酒精溶液：亮绿1克，80~90%酒精100毫升
可染植物组织，细胞质和纤维染成美丽的颜色。
常与番红或苏木精双重染色。
亮绿酒精溶液，可染动物软骨组织。
12.固绿（Fast green)
酸性染料，溶于水和酒精。
0.5%固绿水溶液：固绿0.5克，蒸馏水100毫升
0.5%固绿酒精溶液：亮绿0.5克，95%酒精100毫升
固绿丁香不酒精液：固绿0.5克，丁香油50毫升，无水酒精50毫升
先将固绿溶于无水酒精，再加丁香油。
染植物细胞。也可与苏木精或番红双重染色。
番红染色，酒精分色；固绿液染色30~60分钟，无水酒精脱水。
13.伊红或曙红（E osin Y或B）
最优良的细胞质染料。
常与碱性染料苏木精对动物组织进行对比染色。
14.真曙红（Erythrosin)
优良的细胞质染料。多用于植物组织对比染色。与苏木精或其它核染料对比染色，细胞质呈红色。
1%酒精或丁香油溶液：真曙红1克，95%酒精或丁香油溶液100毫升
1%真曙红水溶液：真曙红1克，蒸馏水99毫升，甲醛1毫升
无水酒精和丁香油各50毫升，加真曙红至饱和。
染色1~2分钟。
15.酸性品红（酸性复红，Acid fuchsim)
1%酸性品红水溶液：酸性品红1克，蒸馏水100毫升
1%酸性品红（70%）酒精溶液：酸性品红1克，70%酒精100毫升
1%酸性品红苯胺水溶液：酸性品红1克，苯胺水溶液100毫升
广泛用于动物组织染色。酸性品红水溶液可染动物组织细胞核和细胞质。一般切片染30`60分钟； 各酸固定的组织需要染12小时以上。
也可染植物组织。对髓部薄壁组织的染色效果良好。还可染胚囊、花粉及寄生于动植物组织中的霉菌等。染色后，经水快速洗涤；酒精快速脱水。
用苯胺水品红液染重铬酸钾和锇酸固定的组织，可显示线粒体 ：加温滴染5分钟，苦味酸酒精液（苦味酸无水酒精饱和液20毫升加20%酒精80毫升）分色，至细胞核呈红色和细胞质呈黄色，70%酒精略洗，再脱水。
16.刚果红(Congo red)
酸性染料
在水中溶解度为5%,在95%酒精中溶解度为0.19%
多用1~2%水溶液:刚果红1~2克,蒸馏水100毫升
可染神经组织；与苏木精或核染料作对比染色：苏木精染色，水洗后用刚果红染色20分钟，水洗分色，转入酒精脱水。
在酸性溶液呈 暗紫色，在碱性溶液呈橙红色。
17.橙黄G（橘黄G，橘红，Orange G)
酸性染料，溶于水和酒精及丁香油（0.5%)。
一般多用水溶液中或含水较多的低浓度酒精。
1%橘黄G水溶液：橘黄G 1克，蒸馏水100毫升
可与番红、结晶紫、甲基绿、酸性品红、苏木精作对比染色。染1~2分钟，用50%酒精或水略洗。
一般植物组织三重染色中，在番红、固绿染色后，再用橘黄G染色10~20秒。
Flemming三重染色中，番红、结晶紫染色后，无水酒精分色，再用橘黄G丁香油饱和液染4~5秒。
橙黄G和酸性品红复合液染动物的结缔组织。
混合液：橙黄G 6克，酸性品红1克，95%酒精60毫升，蒸馏水240毫升。
酸性品红溶于蒸馏水，加橙黄G，再加酒精，充分混合。结缔组织染6~12小时，用50%酒精略洗。
18.苏丹Ⅲ（Sudan Ⅲ） 、苏丹四（Sudan Ⅳ）
专染脂肪组织，呈新鲜橙红色或红色。也可染植物角质和树脂等成分。
苏丹Ⅲ酒精溶液：苏丹Ⅲ加70%酒精溶液100毫升于饱和，取上清液染色15~20分钟，70%酒精速洗。
苏丹Ⅳ酒精液：苏丹Ⅳ加醋酮、70%酒精各50毫升至饱和。
染色1~3分钟用70%酒精醋酮混合液分色，50%酒精脱水。
19.茜素（Alizarin）
酸性染料，染神经组织。中性的茜素酒精溶液可染骨组织切片。染色呈浅棕色，遇碱变紫红色。
20.苯胺蓝
水溶性苯胺蓝（水蓝、中国蓝等）：酸性染料，染藻类和其他植物组织，也可与番红等染料作双重染色。
1%苯胺蓝水溶液：苯胺蓝1克，蒸馏水100毫升
醇溶性苯胺蓝（龙胆蓝）：碱性染料，可染神经纤维，常与卡红作双重染色
1%苯胺蓝酒精溶液：苯胺蓝1克，无水酒精100毫升
Mallory用苯胺蓝0.5克，橙黄G 2克溶于1%磷钼酸水溶液中，染结缔组织，效果很好。