转录激活技术原理

转录激活概述

CRISPR/Cas9系统是一种由RNA引导Cas9蛋白对靶基因进行修饰的技术。将Cas9中切割域突变,就会使Cas9蛋白失去对DNA的切割活性,但不影响其与DNA的结合能力,这种失去DNA切割活性的Cas9蛋白被命名为 Dead Cas9(dCas9) 。利用gRNA介导dCas9能够精确识别靶基因的特点,将dCas9蛋白与具有转录激活功能的蛋白结构域融合,可构建具有转录激活活性的系统,简称CRISPRa。

将dCas9与转录活化域VP64融合,表达的融合蛋白在gRNA介导下结合到启动子区,并通过VP64激活区域与PolII结合,激活基因的转录,提高内源目标基因的表达。

与传统转基因相比,CRISPRa系统是通过激活细胞内源基因表达来提高目标基因的表达量,它不需要转入外源DNA,降低了由于转基因造成的基因组不可逆转突变的风险。另外,结合gRNA文库,可同时激活多个基因的转录与表达。此前Gain-Of-Function筛选主要是通过cDNA文库实现,但由于部分cDNA克隆难度较大致使cDNA文库覆盖率不完全;同时cDNA文库并不能涵盖每个基因的所有转录本;基因的表达也会受到细胞内部元件的调控。利用dCas9-VP64-gRNA系统进行的高通量筛选可在同一个启动子上设计多个gRNA来提高基因的转录活性,基因转录本也会更为全面。已有研究表明,利用CRISPR/Cas9系统选择性的上调基因表达,可以用来诱导干细胞的分化或重编程、刺激组织再生、补偿遗传缺陷、激活已经失活的抑癌基因、进行基因功能筛选以及合成基因回路。

转录激活技术原理

CRISPR/Cas9系统转录激活原理:dCas9与转录活化域VP64融合,表达的融合蛋白在gRNA介导下结合到启动子区,并通过VP64激活区域与PolII结合,激活基因的转录。

(0)

相关推荐

  • 代替吗啡治疗疼痛的依赖!Science子刊:基于CRISPR和锌指蛋白的基因治疗技术缓解慢性疼痛

    慢性疼痛是指持续一个月以上的疼痛,骨关节炎.颈痛.腰痛.头痛.癌痛等均是常见的慢性疼痛.目前,我国至少有一亿以上的慢性疼痛患者.由于它的发作给患者带来的痛楚,会使人出现睡眠紊乱.缺乏食欲.精神崩溃等后 ...

  • 内源基因激活技术原理

    基因过表达是研究基因功能的重要方法,传统过表达方法是通过外源启动子驱动外源目的基因的cDNA表达,该方法并不能很好的模拟基因转录时丰富的转录本,并且受到过表达载体的限制,无法过表达开放阅读框超过20k ...

  • 转录抑制技术原理

    转录抑制概述 CRISPR/Cas9系统是一种由RNA引导Cas9蛋白对靶基因进行修饰的技术.将Cas9中两个核酸酶结构域突变,就会使Cas9蛋白失去对DNA的切割活性,但不影响其与DNA的结合能力, ...

  • 微生物基因组改造技术原理

    一些微生物被应用于工业发酵,生产乙醇.食品及各种酶制剂等.对工业微生物开展的基因组研究,不断发现新的特殊酶基因及代谢过程和代谢产物生成相关的功能基因,可以将其应用于生产以及传统工业.工艺的改造,同时推 ...

  • 全身性敲除技术原理介绍

    基因敲除是研究基因功能的重要方法.传统ES打靶敲除方法,周期长,费用高.CRISPR/Cas9在基因敲除方面的优势:效率高,时间短,24天直接获得基因敲除小鼠. 技术一般的流程 设计合成gRNA→ 显 ...

  • 大肠杆菌基因组编辑技术原理

    基于Red同源重组和CRISPR/Cas9的大肠杆菌基因组编辑服务.成熟的大肠杆菌编辑体系,E.coli BL21, E.coli K-12, MG1655,甚至分离菌株,助您成功实现基因敲除.基因插 ...

  • 铜绿假单胞菌基因组编辑技术原理

    基于Red同源重组和CRISPR/Cas9的铜绿假单胞菌基因组编辑服务.成熟的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)编辑体系,助您成功实现基因敲除.基因插入和点突变. 基于Red ...

  • 毕赤酵母基因组编辑技术原理

    基于Red同源重组和CRISPR/Cas9的毕赤酵母基因组编辑服务.成熟的毕赤酵母(Pichia pastoris)编辑体系,助您成功实现基因敲除.基因插入和点突变. 基于Red同源重组法的毕赤酵母基 ...

  • 枯草芽孢杆菌基因组编辑技术原理

    基于Red同源重组和CRISPR/Cas9的枯草芽孢杆菌基因组编辑服务.成熟的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)编辑体系,助您成功实现基因敲除.基因插入和点突变. 基于Red同源重组法 ...

  • 乳酸菌基因组编辑技术原理

    基于Red同源重组和CRISPR/Cas9的乳酸菌基因组编辑服务.成熟的乳酸菌(Lactic acid)编辑体系,助您成功实现基因敲除.基因插入和点突变. 基于Red同源重组法的乳酸菌基因组改造 乳酸 ...