Western Blot实验细节记方法

1、Western Blot可以除掉电泳缓冲液里面的污染盐 （contaminating electrophoresis buffer salts）这种盐可以提高转渍缓冲液的导电性（conductivity），让其增加了整个转渍系统的热量产生。假设您用PVDF膜的话就更需要小心了，因为它对十二烷基硫酸钠（SDS）的浓度非常敏感。SDS浓度过高的话会抑制蛋白的结合能力，甚至使已经结合的蛋白脱落。

2、Western Blot能够使您的凝胶在转渍前收缩到不会变的大小（shrink to its final size）

这个需要考虑两个方面：个，转渍系统中产生的热量可以使凝胶膨胀扩大；**个，聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel）经常会在含有甲醇的溶液里收缩（大部分转渍液都用甲醇！）。所以，可以提前冷藏转渍液并且让凝胶浸泡在转渍液里至少五分钟。不过假如您的目标蛋白很小的话，需要平衡凝胶少于五分钟，不然分子量较小的蛋白就会从凝胶中扩散（diffuse）到溶液里面了。

3、Western Blot能否防止凝胶和转渍膜变干

假如您刚好有其他的实验要做，就不妨让凝胶和转渍膜浸泡在转渍液里等候一下，这样能够更好的安排其他的时间。通过网上经验，使用PVDF膜和半干转渍系统转移高分子量的蛋白，浸泡2小时是不影响转渍效率的。不过需要注意这仅适用于分子量比较大的目标蛋白。并且若您有所怀疑的话，建议还是别等太久。

那么到底是否需要平衡呢？终还是取决于您的转渍系统：

湿转渍（Wet transfer）: 需要！

半干转渍（Semi-dry transfer）: 需要！

快速真空转渍（Rapid vacuum transfer）: 不需要! 这样的系统不需要电流回路，所以污染盐不会影响。而且转渍很快，凝胶也不会收缩。