CCK8

CCK8

  实验前记得摸清铺孔浓度，可以尝试每个孔1000，2000，3000，5000.贴壁后进行转染，观察0，24，48，72，96h时不同浓度的增殖趋势。

细胞增殖检测

1.在96 孔板中接种细胞悬液 (90 ul/孔，1000/孔 ) 。上下左右留出PBS封边，设置空白孔，（使用 96 孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的 PBS 、水或培养液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发将培养板放在培养箱。）

2.待细胞贴壁后，转染。转染后（0，24，48，72，96h）加入10 ul的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。

3.将培养板在培养箱内孵育2小时。

4.用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

制作标准曲线

1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2.按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3.接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8试剂培养一定时间后测定 O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ，O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8后的培养时间)。