人工抗体用于蛋白定量的免疫印迹分析
通讯作者：高学云、高靓
通讯单位：北京工业大学
对蛋白生物标志物进行准确、灵敏、可靠的分析在肿瘤的早期诊断及疾病的临床治疗中至关重要。基于抗原-抗体的特异性免疫识别分析在生物检测中应用广泛，例如放射免疫分析法，酶联免疫吸附法，蛋白免疫印迹等。然而，在实际应用中，由于蛋白类抗体具有较高的工程化成本，复杂的生物偶联技术瓶颈，或信号增敏能力不理想等问题面临着诸多挑战。另外，为了评估与肿瘤进程相关的一些低丰度蛋白标志物的表达水平，需要发展基于新型抗体的灵敏、精准的蛋白定量分析方法。
基于此，北京工业大学高学云、高靓教授课题组报道了基于新型金团簇人工抗体的蛋白免疫印记技术用于定量肿瘤标志物金属基质蛋白酶MMP14蛋白表达水平，这种人工抗体与传统抗体相比，具有超小的尺寸，本征的荧光及高效的类酶催化活性于一体。通过检测与肿瘤生物标志物蛋白结合的团簇抗体的荧光和催化化学发光，分别建立了高准确度、高灵敏度的蛋白定量分析方法。此方法与传统的蛋白免疫分析方法结果相近，蛋白检出限低至1.0pg，比传统的免疫分析方法低一个数量级。
图 1. (a) 传统免疫分析和 (b) 基于簇体的免疫印迹的示意图。簇体是肽缀合的金属簇，具有精确的分子式、超小尺寸、选择性识别、内在荧光和酶样催化活性。与传统免疫分析相比，这些集成的有利特征有助于蛋白质生物标志物的定量免疫分析，具有更高的灵敏度和高精度。
图 2. (a) MALDI-TOF MS 确定的簇体I和簇体II的准确分子式。(b) 簇体的示意图。(c,e) 簇体 I 和簇体 II 的荧光激发（黑线）和发射（红线；蓝线）光谱。插图：在 365 nm 便携式紫外线灯下的相关照片图像。（d，f）分别从动态光散射分析评估的簇体 I 和簇体 II 的尺寸分布。
参考文献：
Jiaojiao Li, Xiangchun Zhang, Fuping Gao, QingYuan, Chunyu Zhang, Hui Yuan, Yanhong Liu, Lu Chen, Ying Han, Xueyun Gao, Liang Gao, Catalytic Cluster body for Enhanced Quantitative Protein Immunoblot, Anal. Chem. 2021, https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.1c00779.