Cre/LoxP技术是什么?

Cre/LoxP是一种常用的位点特异性的重组系统,可以用于原核生物和真核生物的基因组编辑,主要由两大组分组成:Cre重组酶(Cre recombinase)和一段叫做LoxP 位点的DNA 序列Cre 重组酶是噬菌体P1编码的38kDd的蛋白,可以识别loxP上的两段13bp长的重组结合元件(recombinase binding elements, RBE) 发挥基因编辑作用。

Cre/LoxP的编辑方式主要包括剪切(deletion)、插入(insertion)、易位(translocation)和倒位(inversion):如上图所示,当两个loxP位点同向时(with the same orientation),位点间的序列将以环状DNA的形式切除;两个loxP位点反向时(with an opposite orientation),将发生倒位;位于不同DNA链上的loxP位点则会产生易位。

一般来说的组织特异性敲除所用的Cre/LoxP是不同的启动子Cre(Promoter-regulated Cre)决定作用于什么组织的loxP位点则决定了需要编辑的基因片段;另一大类时间特异性(temporal regulation)的Cre则是借助额外的配体,又称为诱导性Cre(Inducible Cre),决定了Cre/LoxP系统在何种发育阶段发挥编辑作用,如下图,常见的配体有他莫昔酚(4-OH-tamoxifen),还有强力霉素(doxycycline)等。

(0)

相关推荐

  • Cre、Flp等重组酶系统的故事

    随着研究的不断深入,现代神经科学需要关注大量不同种类的神经元或胶质细胞,如多种GABA能中间神经元.小胶质细胞等.遗憾的是,这些细胞往往没有成熟的.不泄露的启动子供选择,那么在这种情况下,我们该如何实 ...

  • Cre/LoxP系统有哪些局限性?

    尽管Cre/LoxP是常用的组织特异性基因编辑手段,它原理上带来的一些局限性也需要大家关注: ①脱靶效应(Off-Target Effects):因为Cre/LoxP系统利用的是组织特异性启动子.增强 ...

  • cre工具鼠构建技术原理

    Cre工具鼠是通过在小鼠marker基因位点敲入Cre/CreERT2或者Dre/DreERT2元件构建而成.Cre工具鼠跟特定的flox小鼠交配,可以实现在巨噬细胞中敲除或者敲入目的基因,完成对基因 ...

  • Cre转基因小鼠制备技术方法

    Cre酶是在噬菌体内发现的一种酶,它能特异性的识别LoxP序列,并把同方向排列的两个LoxP序列之间的DNA切掉. 前面说了,我们把LoxP序列放到了打算敲除基因的两侧,那么我们如果把Cre酶放到细胞 ...

  • Cre重组酶-AAV技术原理

    Cre/loxP重组酶系统,指的是条件性基因打靶.诱导性基因打靶.时空特异性基因打靶策略的技术核心,Cre重组酶可以识别LoxP序列并进行重组,在新型基因打靶中获得广泛应用,是由Sternberg和H ...

  • Cre工具鼠的构建技术原理

    Cre工具鼠,简单来讲就是带有Cre重组酶的小鼠!为什么要使用Cre工具鼠呢?我们都知道当参与生长发育等重要基因缺失后会出现小鼠胚胎致死或出生后过早死亡,导致无法得到存活的子代,从而无法进行科学研究, ...

  • 羊角蜜的栽培技术

    羊角蜜又被叫做羊角脆,是甜瓜的一种中熟品种.羊角蜜的生长能力非常强,花果量也非常大.而且羊角蜜的营养价值是非常高的,有着丰富的蛋白质.维生素及各种微量元素.一上市后就受到了很多人的欢迎,那么羊角蜜该怎 ...

  • 发酵牧草养猪,降低30%饲料成本不是问题,用活力99生酵剂发酵新型牧草养牛、养猪技术

    新型优质牧草品种,具有产量高.营养高等特点,如禾本科类的桂牧一号.新型皇竹草等,含有极高糖分的牧草如糖蔗1号牧草.糖蔗2号牧草.蜜蔗1号牧草等,这些牧草都具有年亩产超过20吨以上,甚至最高超过32吨( ...

  • 【观点】国外41位学者澄清“碳中和”的10个认识误区,特别是不能以“负排放”技术代替减排!<

    来自瑞典.英国.奥地利.丹麦.德国.挪威.瑞士等国家的41位大学教授和学者(名单附后)联合发表文章,澄清关于净零排放目标和碳中和的10个误区. 气候危机的影响越来越严重,无处不在.由于全球变暖,我们正 ...

  • 【劲爆大揭秘!!!利用此技术再次斩获连续涨停板!】

    首先恭喜使用涨停板铺排技术再次斩获连续涨停板股票西藏珠峰600338的朋友,获利幅度50%!这个股票我们前期做过非常详细的分析,并且一直斩钉截铁认为这个股票必然有后市行情!经过一段时间的等待,终于爆发 ...