Cre/LoxP技术是什么?
Cre/LoxP是一种常用的位点特异性的重组系统,可以用于原核生物和真核生物的基因组编辑,主要由两大组分组成:Cre重组酶(Cre recombinase)和一段叫做LoxP 位点的DNA 序列。Cre 重组酶是噬菌体P1编码的38kDd的蛋白,可以识别loxP上的两段13bp长的重组结合元件(recombinase binding elements, RBE) 发挥基因编辑作用。
Cre/LoxP的编辑方式主要包括剪切(deletion)、插入(insertion)、易位(translocation)和倒位(inversion):如上图所示,当两个loxP位点同向时(with the same orientation),位点间的序列将以环状DNA的形式切除;两个loxP位点反向时(with an opposite orientation),将发生倒位;位于不同DNA链上的loxP位点则会产生易位。
一般来说的组织特异性敲除所用的Cre/LoxP是不同的启动子Cre(Promoter-regulated Cre)决定作用于什么组织的,loxP位点则决定了需要编辑的基因片段;另一大类时间特异性(temporal regulation)的Cre则是借助额外的配体,又称为诱导性Cre(Inducible Cre),决定了Cre/LoxP系统在何种发育阶段发挥编辑作用,如下图,常见的配体有他莫昔酚(4-OH-tamoxifen),还有强力霉素(doxycycline)等。
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