一种南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料及其制备方法

专利名称：一种南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料及其制备方法 技术领域： 本发明涉及饲料技术领域，尤其涉及的是一种南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料及其制备 方法。 背景技术： 南方鲇，也称南方大口鲶鱼，此种鱼在饲养过程中常见病有白皮病、打印病、溃疡病、出血病、烂尾病、烂鳃病、肠炎病等。在饲养过程中，这些常见病极大地影响了南方鲇鱼的生产性能和鱼产品的品质。另一方面，由于工业废水、生活污水的排放等，养殖环境进一步恶化，导致鱼类病害频发，而目前的水产养殖业，主要采用广谱的抗生素类来控制病害，这样，不仅造成病菌抗药性增强，干扰鱼类肠道内益生菌菌群的生长繁殖，引起微生态平衡失调，还会造成二次污染，严重影响鱼类的养殖业和水产品品质。微生态制剂是在微生态理论指导下，利用正常微生物或促进微生物生长的物质制成的活性微生物制剂，具有补充、调整和维持动物肠道内微生态平衡的功能。从而达到防治疾病、促进健康及提高生产性能的效果。它是一种绿色、环保、纯生物制剂，无毒、无副作用，无残留污染，不产生抗性，对水体不产生二次污染，微生态制剂在国外由于起步时间早，已经处于快速发展和成熟阶段，而在国内，益生功能菌的微生态制剂的研究起始于上世纪70年底，目前在国内还是一个新兴产业，处于发展初期的起步阶段。目前在市销产品中常用的动物益生菌有芽孢杆菌、乳杆菌、酵母菌、粪链球菌等。国内使用的益生菌粉剂如乳酸菌制剂基本上都是单一的微生态制剂，具有的功能单一，不能满足市场的需求。目前，针对南方鲇的常见病，可供南方鲇饲用的多段控释益生菌复合微生态制剂极少。另外，目前市场上的益生菌制品，多数是非包埋的营养体细胞，个别的微生态制剂采用的是冷冻干燥的方法制备的，不但成本高，存活率较低，同时还普遍存在着保存性差、随保存时间延长活菌数量降低等难以克服的缺点，使产品的应用受到限制，给行业发展带来许多负面影响。因此，有必要针对前述的缺陷对南方鲇等鱼类饲用多段控释益生菌微生态制剂复合饲料及其制备方法做出进一步的研究和改进。  发明内容 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料及其制备方法。本发明的技术方案如下—种南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料，益生菌微生态制剂复合饲料中包括经培养基扩大培养的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus,购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC 6075)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC 6009)、粪肠球菌(Streptococcusfaecalis，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC23658)，分别采用低温喷雾干燥技术、二氧化碳干冰冷冻与真空干燥技术制备微胶囊技术，制成南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料。所述的益生菌微生态制剂复合饲料的制备方法，包括以下步骤步骤一、菌种活化与扩大培养；将冷藏的嗜酸乳杆菌菌种、植物乳杆菌菌种和粪肠球菌分别进行活化、扩大培养后获嗜酸乳杆菌菌悬液、植物乳杆菌菌悬液和粪肠球菌菌悬液；分别将上述嗜酸乳杆菌菌悬液、植物乳杆菌菌悬液和粪肠球菌菌悬液进行过滤，并将过滤后收集到的菌悬液按嗜酸乳杆菌菌植物乳杆菌菌粪肠球菌菌悬液=1:1:2-2:2:1的重量比例进行混合均匀得复合菌悬液，备用；步骤二、快速释放型菌粉制备将步骤一所得的复合菌悬液过滤，在过滤后的悬液中添加占过滤后复合菌悬液总 重量的8%至12%的β -环糊精，5%至8%的多孔淀粉，大豆分离蛋白质5%-8%，13%至16%的无菌水，采用电动搅拌器900转/分钟搅拌20-40分钟后，采用真空干燥器在真空条件为-O. 085MPa，温度为25°C下干燥O. 5h_lh，混合均匀，即得到快速释放型菌粉I ;步骤三、中速释放型菌粉的制备在无菌操作条件下，称取6g_10g的多孔淀粉、6g_10g的壳聚糖于烧杯中，加入IOOmL的无菌水，以该IOOmL无菌水为后续添加物质的参照量，加入O. 5wt%-0. 8 wt %的醋酸，采用电动搅拌器1200转/分钟搅拌20-40分钟后，使壳聚糖和多孔淀粉完全溶解，加入由步骤一制备的复合菌悬液30g-40g，再在室温下采用超声波发生器震荡吸附30-50分钟，加入2 wt %海藻酸钠溶液得乳化液，用注射器将乳化液挤入15-25mL的浓度为2%的Cacl2溶液中，固化30min成膜；过滤后用50-60mL的浓度为3. 5%0&(12溶液浸泡IOmin进行硬化，再过滤取得样品，用清水漂去表面的Cacl2残液，再用灭菌的生理盐水洗涤微胶囊表面菌体。再采用-78°C的二氧化碳干冰冷冻5-8分钟，采用真空干燥器在真空条件为-O. 085MPa,温度为25°C下干燥O. 5h-lh，得中速释放型菌粉2 ；步骤四、慢速释放型菌粉的制备在无菌操作条件下，称取7g_llg玉米醇溶蛋白质于烧杯中，加入IOOmL的食品级无水乙醇，将步骤三制备的中速释放型菌粉25-35g分散于乙醇中，采用电动搅拌器1200转/分钟搅拌20-40分钟后，经低温喷雾干燥，进口温度90°C 105°C，出口温度60°C 65°C，喷雾干燥后，收集得到慢速释放型菌粉3 ；步骤五、多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料制备分别将快速释放型菌粉I、中速释放型菌粉2和慢速释放型菌粉3按2:1:1至1:1:2重量比例进行混合，取混合菌粉，然后添加7%至9%的豆渣，5%至7%的花生仁粉，3%至5%的乳清浓缩蛋白质，8至10%的大豆分离蛋白质，酵母粉3%至5%，鱼油I. 1%至3. 5%，玉米粉8. 3 %至10. 5%，复方氨基酸2%，预混料I. 3 %至2. 8%，淀粉13 %至15%，大豆粉10%至13%，采用电动搅拌器900转/分钟搅拌20-40分钟后，混合均匀，即得到多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料。实验结果表明，该复合饲料可以明显促进南方鲇等鱼类生长，饲养幼鱼45d后，南方鲇鱼量增加分别比对照组提高了 12. 4%，蛋白质效率提高32. 5%，发病率降低30%-40%，该微生态制剂复合饲料可以改善机体的代谢，补充机体的营养成分，有益菌进入消化道后可进一步繁殖，产生动物生长过程中必须的营养物质，提高饲料的转化率，促进南方鲇的生长，且使得南方鲇的肉质更细嫩、味道更鲜美，具有更好的食用价值，造就更好的经济价值。且本发明所提供的一种用于南方鲇的微生态制剂制备方法，工艺步骤简单，所用材料成本低，适于工业化生产，应用范围广阔。 具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。本发明一方面提供了一种南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料，包含经培养基扩大培养的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus,购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC 6075)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC 6009)、粪肠球菌(Streptococcus faecalis,购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC23658)，分别采用低温喷雾干燥技术、二氧 化碳干冰冷冻与真空干燥技术制备微胶囊技术，制成南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料。首先采用低温喷雾干燥技术分别将嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、粪肠球菌制成单壁材微生态制剂，再将嗜酸乳杆菌菌粉、植物乳杆菌菌粉、粪肠球菌菌粉按3 2 I至2:2:3的重量比例进行混合，然后二氧化碳干冰冷冻与真空干燥技术将复合菌粉制成双层壁材的微生态制剂；最后，将三种菌混合物、单层壁材的微生态制剂和双层壁材的微生态制剂按一定比例南方鲇饲料基物混合均匀，制成南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料。本发明另一方面提供了一种用于南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料制备方法，所述的方法以嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、粪肠球菌为主制备复合微生态制齐U，按照如下步骤进行操作步骤一、菌种活化与扩大培养将冷藏的嗜酸乳杆菌菌种、植物乳杆菌菌种和粪肠球菌分别进行活化、扩大培养后获嗜酸乳杆菌菌悬液、植物乳杆菌菌悬液和粪肠球菌菌悬液。嗜酸乳杆菌用培养基配方蛋白胨9g，酵母膏7g，乳清粉Sg，牛肉膏13 g，葡萄糖14 g,乙酸钠 4 g，氯化钠 5g，柠檬酸铵 2. 4g，吐温-80 0. 8ml，MgSO4 · 7H20 O. 63 g, MnSO4 4H20 O. 07 g, K2HPO4 2 g，琼脂粉 16g，水 1000 mL。植物乳杆菌用培养基配方酵母膏7. 5g,蛋白胨7. 5g,乳清粉6g,牛肉膏Ilg,葡萄糖 IOg,氯化钠 5g，KH2P04 2g，西红柿汁 100ml，吐温-80 0. 5ml，蒸馏水 1000ml, pH 7. O。粪肠球菌用培养基配方蛋白胨9g,麦芽糖18g,酵母膏5g,甘油磷酸钠8g,氯化钠5g，乳糖0.8g，溴甲酚紫O.Olg，叠氮钠0. 35g，TTC O. lg，琼脂15g蒸馏水1000ml，pH 值 7. 2。分别将上述嗜酸乳杆菌菌悬液、植物乳杆菌菌悬液和粪肠球菌菌悬液进行过滤，并将过滤后收集到的菌悬液按嗜酸乳杆菌菌植物乳杆菌菌粪肠球菌菌悬液=1:1:2-2:2:1的重量比例进行混合均匀得复合菌悬液，备用。 步骤二、快速释放型菌粉制备将步骤一所得的复合菌悬液过滤，在过滤后的悬液中添加占过滤后复合菌悬液总重量的8%至12%的β -环糊精，5%至8%的多孔淀粉，大豆分离蛋白质5%-8%，13%至16%的无菌水，采用电动搅拌器900转/分钟搅拌20-40分钟后，采用真空干燥器在真空条件为-O. 085MPa，温度为25°C下干燥O. 5h_lh，混合均匀，即得到快速释放型菌粉I。步骤三、中速释放型菌粉(单层壁材的菌粉)的制备在无菌操作条件下，称取6g_10g的多孔淀粉、6g_10g的壳聚糖于烧杯中，加入IOOmL的无菌水(以该IOOmL无菌水为后续添加物质的参照量)，加入O. 5wt%-0. 8 wt %的醋酸(以IOOmL无菌水为参照)，采用电动搅拌器1200转/分钟搅拌20-40分钟后，使壳聚糖和多孔淀粉完全溶解，加入由步骤一制备的复合菌悬液30g-40g，再在室温下采用超声波发生器震荡吸附30-50分钟，加入2 wt %海藻酸钠溶液得乳化液，用注射器将乳化液挤入15-25mL的浓度为2%的Cacl2溶液(无菌)中，固化30min成膜。过滤后用50_60mL的浓度为3. 5%Cacl2溶液浸泡IOmin进行硬化，再过滤取得样品，用清水漂去表面的Cacl2残液，再用灭菌的生理盐水(O. 85wt%)洗涤微胶囊表面菌体。再采用-78°C的二氧化碳干冰冷冻5-8分钟，采用真空干燥器在真空条件为-O. 085MPa，温度为25°C下干燥O. 5h_lh，得中速释 放型菌粉(单层壁材的菌粉)2。步骤四、慢速释放型菌粉(双层壁材的菌粉)的制备在无菌操作条件下，称取7g_llg玉米醇溶蛋白质于烧杯中，加入IOOmL的食品级无水乙醇(以此为后续添加物参照量)，将步骤三制备的中速释放型菌粉25-35g (单层壁材的菌粉)分散于乙醇中，采用电动搅拌器1200转/分钟搅拌20-40分钟后，经低温喷雾干燥，进口温度90°C 105°C，出口温度60°C 65°C，喷雾干燥后，收集得到慢速释放型菌粉(双层壁材的菌粉)3。步骤五、多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料制备分别将快速释放型菌粉I、中速释放型菌粉2和慢速释放型菌粉(双层壁材的菌粉)3按2:1:1至1:1:2重量比例进行混合，取IOOg混合菌粉(以此为后续添加物参照量)，然后添加7%至9%的豆渣，5%至7%的花生仁粉，3%至5%的乳清浓缩蛋白质，8至10%的大豆分离蛋白质，酵母粉3%至5%，鱼油I. 1%至3. 5%，玉米粉8. 3 %至10. 5%，复方氨基酸2%，预混料I. 3 %至2. 8%，淀粉13 %至15%，大豆粉10%至13%，采用电动搅拌器900转/分钟搅拌20-40分钟后，混合均匀，即得到多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料。该南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料，在养殖南方鲇等鱼类时，按100条鱼计,幼鱼每天饲养3-5次,成鱼每天饲养5-7次,每次4kg-6kg,实验结果表明，该复合饲料可以明显促进南方鲇等鱼类生长，饲养幼鱼45d后，南方鲇鱼量增加分别比对照组提高了 12. 4%，蛋白质效率提高32. 5%，发病率降低30%-40%，该微生态制剂复合饲料可以改善机体的代谢，补充机体的营养成分，有益菌进入消化道后可进一步繁殖，产生动物生长过程中必须的营养物质，提高饲料的转化率，促进南方鲇的生长，且使得南方鲇的肉质更细嫩、味道更鲜美，具有更好的食用价值，造就更好的经济价值。且本发明所提供的一种用于南方鲇的微生态制剂制备方法，工艺步骤简单，所用材料成本低，适于工业化生产，应用范围广阔。应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。 权利要求 1.一种南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料，其特征在于，益生菌微生态制剂复合饲料中包括经培养基扩大培养的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus,购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC 6075)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum,购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC 6009)、粪肠球菌(Streptococcus faecalis,购于中国工业微生物菌种保藏管理中心,编号CICC23658),分别采用低温喷雾干燥技术、二氧化碳干冰冷冻与真空干燥技术制备微胶囊技术，制成南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料。 2.根据权利要求I所述的益生菌微生态制剂复合饲料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 步骤一、菌种活化与扩大培养； 将冷藏的嗜酸乳杆菌菌种、植物乳杆菌菌种和粪肠球菌分别进行活化、扩大培养后获嗜酸乳杆菌菌悬液、植物乳杆菌菌悬液和粪肠球菌菌悬液；分别将上述嗜酸乳杆菌菌悬液、植物乳杆菌菌悬液和粪肠球菌菌悬液进行过滤，并将过滤后收集到的菌悬液按嗜酸乳杆菌菌植物乳杆菌菌粪肠球菌菌悬液=1:1:2-2:2:1的重量比例进行混合均匀得复合菌悬液，备用； 步骤二、快速释放型菌粉制备 将步骤一所得的复合菌悬液过滤，在过滤后的悬液中添加占过滤后复合菌悬液总重量的8%至12%的β -环糊精，5%至8%的多孔淀粉，大豆分离蛋白质5%-8%，13%至16%的无菌水，采用电动搅拌器900转/分钟搅拌20-40分钟后，采用真空干燥器在真空条件为-0. 085MPa，温度为25°C下干燥0. 5h_lh，混合均匀，即得到快速释放型菌粉I ; 步骤三、中速释放型菌粉的制备 在无菌操作条件下，称取6g-10g的多孔淀粉、6g-10g的壳聚糖于烧杯中,加入IOOmL的无菌水，以该IOOmL无菌水为后续添加物质的参照量，加入0. 5wt%-0. 8 wt %的醋酸，采用电动搅拌器1200转/分钟搅拌20-40分钟后，使壳聚糖和多孔淀粉完全溶解，加入由步骤一制备的复合菌悬液30g-40g，再在室温下采用超声波发生器震荡吸附30-50分钟，加入2wt %海藻酸钠溶液得乳化液，用注射器将乳化液挤入15-25mL的浓度为2%的Cacl2溶液中，固化30min成膜；过滤后用50-60mL的浓度为3. 5%Cacl2溶液浸泡IOmin进行硬化，再过滤取得样品，用清水漂去表面的Cacl2残液，再用灭菌的生理盐水洗涤微胶囊表面菌体。再采用-78°C的二氧化碳干冰冷冻5-8分钟，采用真空干燥器在真空条件为-0. 085MPa，温度为25°C下干燥0. 5h-lh，得中速释放型菌粉2 ； 步骤四、慢速释放型菌粉的制备 在无菌操作条件下，称取7g-llg玉米醇溶蛋白质于烧杯中，加入IOOmL的食品级无水乙醇，将步骤三制备的中速释放型菌粉25-35g分散于乙醇中，采用电动搅拌器1200转/分钟搅拌20-40分钟后，经低温喷雾干燥，进口温度90°C 105°C，出口温度60°C 65°C，喷雾干燥后，收集得到慢速释放型菌粉3 ； 步骤五、多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料制备 分别将快速释放型菌粉I、中速释放型菌粉2和慢速释放型菌粉3按2:1:1至1: 1:2重量比例进行混合，取混合菌粉，然后添加7%至9%的豆渣，5%至7%的花生仁粉，3%至5%的乳清浓缩蛋白质，8至10%的大豆分离蛋白质，酵母粉3%至5%，鱼油I. 1%至3. 5%，玉米粉8. 3 %至10. 5%，复方氨基酸2%，预混料I. 3 %至2. 8%，淀粉13 %至15%，大豆粉10%至13%，采用电 动搅拌器900转/分钟搅拌20-40分钟后，混合均匀，即得到多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料。 全文摘要 本发明公开了一种南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料，益生菌微生态制剂复合饲料中包括经培养基扩大培养的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、粪肠球菌，分别采用低温喷雾干燥技术、二氧化碳干冰冷冻与真空干燥技术制备微胶囊技术，制成南方鲇饲用多段控释的益生菌微生态制剂复合饲料。实验结果表明，该复合饲料可以明显促进南方鲇等鱼类生长，饲养幼鱼45d后，南方鲇鱼量增加分别比对照组提高了12.4%，蛋白质效率提高32.5%，发病率降低30%-40%。 文档编号A61K9/50GK102919542SQ20121045243 公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月13日 优先权日2012年11月13日 发明者邢亚阁, 车振明, 许青莲, 马嫄, 刘平, 关统伟, 张良, 曾亮, 龚丽, 张丽珠, 卢靖 申请人:西华大学