【干货收藏】Image J 图像处理，你都学会了么？

导语

Western Blot几乎是研究蛋白的童鞋必须get的实验技能，上一期文章和大家探讨了如何优化WB实验，详情请戳：『【干货收藏】WB结果不好，究竟哪儿出问题了？』WB的实验结果通常以图片的形式呈现，但是，蛋白条带并不是那么直观，因此需要将其量化，做成柱状图。

WB蛋白条带灰度分析的软件有很多，今天我们就为大家介绍一款免费软件：Image J。

文末有福利

Image J是一款功能强大且免费的图像分析软件！该软件基于Java平台，是NIH开发的免费图像分析软件，支持Windows、Linux和MacOS三大平台，在生物医学研究领域有着广泛的应用。Image J功能强大，有着如图像的区域大小和像素统计、细胞计数和灰度分析等诸多功能。今天为大家介绍的是利用ImageJ对WB结果进行灰度分析！

01

软件安装

1. 下载地址：https://imagej.nih.gov/ij/download.html

2.下载windows 32位带Java版本，双击软件安装

02

界面介绍

界面分为：菜单栏，工具栏和状态栏

● 菜单栏包括：文件，编辑，图形，处理，分析，插件，窗口，帮助。

● 工具栏从左至右的4种分别是：区域选择工具 ，直线选择工具，角度工具，点工具

03

图片分析

1.以下图作为样板图片

2.导入图片：File> Open> Sample.jpg

图片导入后，Sample.jpg在新的窗口中打开

3. 图片类型设置：Image> Type> 8 bit

4. 去除图片背景：Process> Subtract Background> …

5. Subtract Background 窗 口 ：Rolling ball radius 设 为 50 pixels ， 勾 选 light background，可选preview，点击“OK”确定

6. 工具栏:选择“矩形选框”

最大化“Sample.jpg”窗口，便于矩形选择，矩形选择第一个泳道

7. 标记“矩形选框”为1：矩形选择后，调整矩形至合适大小，按下数字键“1”，或者Analyze>Gels>SelectFistLane。我们可以看到黄色选框内出现了数字“1”

8. 选择“泳道2”：按住Ctrl键拖动“1”的矩形框，会出现两个矩形选框，拖动矩形框至泳道2，我们可以看到该软件自动复制了一个矩形选框，框选好第二个条带之后按数字键“2”，我们可以看到黄色选框内出现数字“2”；ImageJ会自动调整大小使“矩形框2”与“矩形框1”保持同一水平

9. 继续拖动选框到第三个条带，你以为这个时候要按数字“3”了么？那你就错了，这个时候还是按数字键“2”（注意：是按下数字键“2”），接下来的4-8条带均是按数字键“2”，这个地方有很多人会搞错，其实这些数字只是调用命令的快捷方式，并不是对第几条条带的标记，所以这样你就明白了吧

10. 所有泳道选择后，按下数字键“3”，这个时候会跳出包含多个曲线图的窗口

11. “直线”封闭峰：接下来，我们选择直线工具，将上述曲线封闭，如下图：

12. 计算峰值：工具栏>Wand(tracing)tool,点下刚才封闭的区域，峰值结果出现在新的窗口中

13. 计算结果：

14. 其他泳道，以此类推。

灰度分析后就是将各个条带的数据进行绘图，绘图软件可以选择Origin 或者Graphpad，小编将在后期分享相关的绘图软件操作，敬请期待，大家不要错过呦~