碱性磷酸酶染色CALP Stain Kit与非特异性酯酶染色的介绍及染色操作方法

碱性磷酸酶染液，用于石蜡切片、冰冻切片、骨髓细胞涂片、血液涂片等的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。非特异性反应少,结果可靠。

成熟中性粒细胞中含有较多碱性磷酸酶。在碱性条件下，碱性磷酸酶经镁离子激活后能将磷酸酯水解为磷酸钠和甘油，磷酸钠再与氯化钙、硝酸钴、硫化铵发生一系列化学反应，生成棕色的硫化钴定位于胞质内。

介绍一下碱性磷酸酶染色的方法：

1.需要准备的试剂：

（1）孵育液：30g/Lβ-甘油磷酸磷酸磷酸钠5ml，20g/L巴比妥钠5ml，20g/LCaCl210ml，其pH以9.2～9.5为宜。

（2）20g/L硝酸钴。

（3）20g/L硫化铵（新鲜配制），或10ml蒸馏水加硫化铵4滴混合。

（4）10g/L伊红。

操作方法

（1）将标本用95%乙醇固定10min，晾干。

（2）置标本于37℃的孵育液中，保温6～8小时。

（3）加20g/L硝酸钴5min。

（4）流水冲洗，滴加20g/L硫化铵5min。

（5）流水冲洗，加10g/L伊红复染5min。

（1）孵育液：30g/Lβ-甘油磷酸磷酸磷酸钠5ml，20g/L巴比妥钠5ml，20g/LCaCl210ml，其pH以9.2～9.5为宜。

（2）20g/L硝酸钴。

（3）20g/L硫化铵（新鲜配制），或10ml蒸馏水加硫化铵4滴混合。

（4）10g/L伊红。

正常值 成熟中性粒细胞呈阳性，其他细胞均呈阴性。阳性积分正常参考值：80分以下（以计算100个中性杆状核和分叶核粒细胞为准）。

在临床上的意义：

积分降低：见于病毒感染，恶性组织细胞增生症，阵发性睡眠性血红蛋白尿症，急、慢性粒细胞性自血病，红、白血病，骨髓增生异常综合征，继发性红细胞增多症，急性单核细胞性白血病，慢性淋巴细胞白血病。当病情缓解时，积分又可上升到正常。

积分升高：见于化脓性细菌感染、急性大出血、原发性血小板增多症、再生障碍性贫血、红血病、骨髓增生性疾病、急性淋巴细胞白血病、类白血病反应、恶性淋巴瘤、恶性肿瘤、激素治疗等。再生障碍性贫血治疗好转时，积分可降低。

非特异性酯酶染色

用于急性单核细胞白血病与其他类型白血病的鉴别诊断。在急性单核细胞白细胞病时，NSE为强阳性反应；而粒细胞和淋巴细胞为阴性反应。

血细胞中所含酯酶各不一致，但皆系作用于短链脂肪酸的酯酶，统称非特异性酯酶。其显示方法是采用偶氮偶联法。由于提供水解的基质不同，血细胞中常见酯酶有以下几种：

α-乙酸萘酚酯酶（α-naphthol acetate esterace,α-NAE)

乙酸AS-D萘酚酯酶（naphthol-AS-D-acetate esterase,AS-D-AE）

醋酸AS萘酚酯酶（naphthol-AS-acetate esterase,AS-AE）

氯化醋酸AS-D萘苯分醋酶（naphthol-AS-D-Chloroacetate esterase,AS-D-CE）

非特异性酯酶染色检查nonspecificesterase，NSEα-醋酸萘酚酯酶(α-NSE)染色检查、单核细胞型酯酶染色检查能将基质液中的α-醋酸萘酚水解，产生α-萘酚，再与重氮染料偶联，形成不溶性的有色沉淀，定位于胞质内。

碱性磷酸酶染液（偶氮偶联法，适用于细胞样本）

酸性磷酸酶染液

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血管通透性测试（伊文思蓝）染液

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zzj 2021.2.5