苏木精伊红（HE）染色技术

用含锇酸或重铬酸钾固定的组织，不如其它固定液固定的组织染色鲜艳，细胞质往往呈淡棕色，可用Cowdry法漂白，然后染色：发表

切片入1%高锰酸钾水溶液30秒，至5%草酸水溶液30秒，蒸馏水洗。

用Susa液固定的组织，染色优于其它固定液。

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方法：

⑴新鲜组织固定于甲醛、酒精、Bouin液、Zenker液、Susa液等，石蜡切片或火棉胶切片、冰冻切片。

⑵石蜡切片烘干，用二甲苯将石蜡脱去。

⑶无水酒精两次洗涤将二甲苯 洗去。

⑷快速经95%、90%、80%、70%酒精至蒸馏水洗（洗去酒精）。

*含升汞固定液固定的组织，脱蜡至70%酒精，镜检是否有棕褐色沉淀，如有，入70%酒精加碘酒 少许处理数分钟，入5%硫代硫酸钠水溶液将碘脱去，自来水充分洗涤后染色。

⑸入苏木精染色5~15分钟。Harris苏木精5~10分钟；气管、喉、骨发生最好用Hansen苏木精，Harris苏木精对软骨基质不易着色。也可选用Ehrlich酸性苏木精或Delafield苏木精或Mayer苏木精。Zenker液固定的组织，染色时间加长。

用含重铬酸钾固定的组织，细胞核着色不够鲜艳；甲醛长期固定的组织，细胞核着色困难，需经自来水充分冲洗，再用碳酸锂饱和液中和10分钟或更久，然后染色。

用Susa液，甲醛酒精液（FA）或Bouin液固定则较好。

⑹自来水洗去浮色。

⑺经0.5~1%盐酸70%酒精（盐酸酒精）数秒至1分钟，将细胞核外的着色部分脱去。细胞核呈紫红色。胶原纤维、肌组织及细胞质无色。

盐酸分色是将过染的和复染的颜色除掉。，仅保留细胞核的合理着色。分色时间根据苏木精着色情况决定。分色后的细胞核呈淡红紫色，不易判断。经碱化处理后，细胞核呈蓝紫色，才能正确判断分色。如细胞核褪色过多，需重回苏木精溶液染色。

⑻经碱性溶液如稀碳酸锂水溶液或淡氨水或氨酒精或自来水冲洗，至细胞核变为蓝色。细胞核碱化用蒸馏水洗数分钟，将切片上的碱液洗去，否则伊红不易上色，尤其是氨酒精碱化的切片。最好用自来水 长时浸泡使切片返蓝。

苏木精分色后最好用自来水较长时间缓慢冲洗于蓝色。用氨酒精碱化很快，但容易脱片。过强的碱性会影响伊红着色。经氨酒精返蓝后，还须经自来水或蒸馏水洗，除去残留的氨水，才能复染伊红。也可经下列酒精上行时逐步洗掉组织上的碱液。

⑼经70%、80%、90%、95%酒精脱水各1分钟。

⑽入0.5~1%伊红（95%）酒精溶液染色数秒至数分钟。

伊红不上色或掉色：劣质的伊红在酒精脱水时往往被洗掉，可加极少量冰醋酸。用同等浓度的酒精分色，将多余的伊经颜色洗掉。伊红不上色还有酒精内含有碱性成分如氨没洗干净，或者某些嗜碱性强的组织如淋巴结，伊红染色时间延长。

⑾95%酒精分色两次，将多余的红色洗去。

⑿无水酒精脱水2~3次，各1~5分钟。

⒀二甲苯透明2~3次，各2~5分钟。

⒁将玻片取出，用布将切片四周的二甲苯擦去，滴一滴树胶，加盖玻片封片。

简化步骤：

①脱蜡二甲苯Ⅰ→脱蜡二甲苯→②无水酒精Ⅰ→无水酒精Ⅱ→95%酒精→90%酒精→80%酒精70%酒精→蒸馏水→③苏木精染液→自来水→④盐酸酒精→⑤70%酒精→氨酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→③伊红液→④95%酒精Ⅰ→95%酒精Ⅱ→⑤无水酒精Ⅰ→无水酒精Ⅱ→无水酒精Ⅲ→⑥透明二甲苯Ⅰ→透明二甲苯Ⅱ→透明二甲苯Ⅲ

说明：①脱蜡；②水化（下行酒精至水）；③染色；④分色；⑤脱水（上行酒精至无水）；⑥透明

结果：

细胞核蓝紫色；细胞质、胶原纤维、肌纤维及嗜酸性颗粒桃红色，弹性纤维明亮桃红色。

若苏木精染色过深，分色不足，细胞质和纤维带蓝色；若苏木精染色过淡，则细胞核带红色。

块染的苏木精：

Harris苏木精：原液10亳升加蒸馏水90毫升

Ehrlich苏木精：原液10毫升加蒸馏水 90毫升

Ehrlich苏木精原液10毫升加70%酒精90毫升

伊红：

0.5%复制伊红70毫升加蒸馏水25毫升

0.5%复制伊红80毫升加蒸馏水15毫升