微生物检测中培养基的质量控制

培养基是液体、半固体或固体形式的,含天然或合成成分,用于保证微生物繁殖或保持其活力的物质。培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作的重要环节,培养基自身质量的优劣、保存是否得当、配制使用是否正确等都直接影响到检测结果的准确性。环凯对微生物实验室在培养基购置、贮存、制备、使用等方面应采取的质量控制措施进行讨论,提一些建议。希望有助于微生物检测工作的同行们更好的开展工作。

培养基的购置与验收

1.购置

从培养基自身的质量来看,不同生产厂家的产品,甚至同一厂家不同批号的产品都会存在差异。依据ISO/IEC17025《检测和校准实验室能力的通用要求》,对培养基的供应企业进行评价后选择合格的供应商,这是培养基购买过程中重要的步骤。应选择产品市场信誉度高、有质量保证能力和服务保证能力的企业;企业是否通过了质量管理体系的认证是较为客观的评价指标。要求生产企业提供:培养基成分名称及产品编号、批号、使用前的pH、储藏信息和有效期、性能评价和所用测试菌株、技术数据清单、质控证书以及必要的安全/危害数据等材料。

2.验收

购买的培养基到货后,应有专人做好接受和验收工作,应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。每批培养基到货物后都应对培养基的质量进行检测,满足检测方法规定的要求后方可投入使用。

培养基的储存

干粉培养基应保存在阴凉干燥处,要避免阳光直射;未开瓶的培养基在室温下的最长保存2年,开瓶后的干粉培养基易吸湿,应注意防潮并在6个月内用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查,如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查,如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。

培养基的制备

1.培养基用水

培养基制备用水应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水或与其同质的水,最好不使用离子交换器生产的去离子水。

2.称量

称量时要用专用的角匙,避免交叉污染而影响检验结果;干粉培养基易吸潮,如有条件,尽量在湿度较低的房间称取培养基。

3.复水

复水时不得用铜锅或铁锅,以防有离子混入培养基中,影响微生物的生长;容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上,避免在加热溶解过程中,培养基溢出;含有琼脂粉的培养基,在加热溶解之前可以浸泡数分钟;加热培养基时一定要进行搅拌,特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出,对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏,并可产生有毒物质,如发现焦化,或未溶解均匀前培养基有溢出,该培养基即不能使用,应重新制备。对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热,最多只能加热两次,第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。

4.灭菌

一般培养基采用湿热灭菌,即高压蒸汽灭菌,通常是121℃ 15min,含糖或特殊培养基,按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。已配制好的培养基必须立即灭菌,避免微生物生长繁殖而消耗养分,改变培养基的酸碱度。高温可破坏培养基的营养成分,还会使琼脂的凝胶强度下降,因此必须严格控制灭菌温度和时间,并且不可重复灭菌。高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定,并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。

5.pH测定

微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。培养基配方要求的pH为灭菌或消毒后的pH值,即培养基使用前的pH,并应在25℃温度下采用精密酸度计进行测量,固体琼脂培养基应以特殊的胶体表面测量电极进行测量。使用过程中,如果需要调整培养基的pH,应用1mol/LNa0H或 lmol/LHCL调整,注意不可反复调pH,否则会影响培养基的渗透压。

6.配制好的培养基保存

灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择性效果。所配制的培养基的量,应该是在最长保存期限内正好使用完。含染料的培养基应闭光保存;倒好的琼脂平板如果配制的当天未使用完,应于冷藏保存,如果保存时间超过2天,应将其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期,应将其放在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发。

培养基的性能测试

1.外观控制

制备好的培养基应有相应的颜色,一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化,是否蒸发/脱水。

2.污染控制

从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验),确定无微生物生长方可使用。

3.性能测试

  1. 测试菌株选择 测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株,应来自国际/国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株,菌株的选择参考卫生行业标准WS/T232-2002《商业性微生物培养基质量检验规程》。

  2. 定量测试方法(改良Miles-Misra法) 测试菌株过夜培养物10倍递增稀释;测试平板和参照平板划分为4个区域并标记;从最高稀释度开始,分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域;将稀释液涂满整个1/4区域,37°C培养18小时;对易计数的区域计数,按公式计算生长率(生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数/参考培养基平板上获得的菌落总数)。非选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.7,该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.1。

  3. 半定量测试方法(改进的划线法接种法) 平板分ABCD四区,共划16条线,平行线大概相隔0.5cm,每条有菌落生长的划线记作1分,每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分,没有菌落生长或生长量少于划线的一半记作0分,分数加起来得到生长指数G。目标菌在培养基上应呈现典型的生长,而非目标菌的生长应部分或完全被抑制,目标菌的生长指数G大于6时,培养基可接受。

  4. 定性测试方法(平板接种观察法) 用接种环取测试菌培养物,在测试培养基表面划平行直线。按标准中规定的培养时间和温度对接种后的平板进行培养,目标菌应呈现良好生长,并有典型的菌落外观、大小和形态,非目标菌应是微弱生长或无生长。

培养基的质量是微生物实验室检测工作的基础,事关检测工作的准确性、可靠性,在微生物实验室检测工作中举足轻重。如果在工作中忽视任何一个环节的质量问题,都将导致检验结果科学性、客观性的偏离。因此,加强培养基的实验室质量控制,认真地做好培养基的质控工作,不断完善和提高培养基的质控水平,才能为微生物检测实验室提供高质量的培养基。

(0)

相关推荐

  • 菌落总数检测常见问题答案看这篇!

    食品微生物检测       菌落总数作为判定食品被细菌污染程度的标志,也可以应用这一方法观察食品中细菌的性质以及细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供科学依据. 今天,小编就和大家 ...

  • 深度|微生物检测知识梳理,跳出标准学方法!

    前言 本人喜好微生物.生物学的程度和喜欢温柔美丽善良姑娘的程度不向上下.对微生物学的热情使得我在从事微生物基础检测的理论方面可能有所心得. 说明一下,我讲的方法是方法,也不是方法.如果有一个人智慧得到 ...

  • 霉菌和酵母检测有何不同?

    食品微生物检测 霉菌和酵母的检测是我们食品微生物检测的一个重要项目.霉菌是丝状真菌的俗称,绒毛状.絮状或蛛网状的真菌菌落:没有菌丝的称之为酵母.这并非分类学名词. 相对于细菌来说,霉菌和酵母生长缓慢, ...

  • 查缺补漏 | 10.1 微生物的利用及在传统发酵技术中的应用

    提纲 核心点拨1.微生物的培养 (1)无菌技术:主要包括消毒和灭菌.①消毒方法:常用煮沸消毒法.巴氏消毒法.②常用灭菌方法:灼烧灭菌--接种环.接种针等金属器具:干热灭菌--主要针对玻璃器皿等:高压蒸 ...

  • 微生物实验室质控菌株复苏保存相关常见问答

    食品微生物检测 01 菌株保存的是第三代,-80℃保存, 再取出来活化的话属于第几代? 答:保存的是第三代复活出来后,如果采用平板或肉汤活化相当于转接了一代,就是第四代,如果还在瓷珠里的话就还是原来的 ...

  • 活菌数怎么检测?看看这5大方法

    编者按 活菌数是益生菌产品的重要属性之一,因为活菌数可能会影响益生菌产品的效果.活菌数不仅对于益生菌企业和消费者具有重要的意义,对于监管部门而言也十分重要. 那么活菌数要怎么检测呢?除了平板培养以外, ...

  • 实验一线操作,微生物检测过程中的问题及解答!

    食品实验室服务 1.食品微生物菌落总数的测定可以只做一个稀释度吗? 答:GB 4789.2要求每个样品选择2-3个适宜的稀释度进行检测.即使一个样品已经基本可以确定了菌落数了,也建议多检测一个稀释度, ...

  • 史上最全丨培养基质量控制与保存,不看后悔!

    食品微生物检测 01 物理性状的质量控制 应包括20℃ -25 ℃时的pH,并应观察以下内容:加入培养基的量和(或)琼脂层的厚度.颜色.透明度.是否存在肉眼可见的杂质.凝胶稳定性/黏稠度(一致性).湿 ...

  • 消毒和灭菌两个概念有区别么?微生物检测中常用的灭菌和消毒方法汇总!

    食品实验室服务 消毒和灭菌两个词在实际使用中常被混用,其实它们的含义是有所不同的. 消毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和内部的病原菌营养体的方法,而灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微 ...

  • 微生物检测中菌悬液不会制备,化验结果怎么能保证准确?

    对于微生物实验室的小伙伴们来说,每天除了面对接样,检测样品,配培养基等各种瓶瓶罐罐交响曲以外,制备合适浓度的菌悬液应该是每天的头号大事了,毕竟有太多的项目需要合适浓度的菌悬液,产品方法适用性,培养基促 ...

  • PCR技术在微生物检测中的应用

    PCR即聚合酶链式反应,是一种体外扩增DNA序列的技术.现代PCR概念最早是由美国科学家Kary Mullis于20世纪80年代早期发明的,他也因此荣获了1993年的诺贝尔化学奖.如今该技术已成为生物 ...

  • 微生物检测中菌悬液制备

    对于微生物实验室的小伙伴们来说,每天除了面对接样,检测样品,配培养基等各种瓶瓶罐罐交响曲以外,制备合适浓度的菌悬液应该是每天的头号大事了,毕竟有太多的项目需要合适浓度的菌悬液,产品方法适用性,培养基促 ...

  • 微生物检测中常用的细菌接种方法汇总!

    常用的细菌接种方法有平板划线分离法.斜面接种法.穿刺接种法.液体和半固体接种法.涂布接种法等. 一.平板划线分离法 平板划线分离法:是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培 ...

  • 微生物检测中常用的灭菌和消毒方法

    消毒和灭菌两个词在实际使用中常被混用,其实它们的含义是有所不同的.消毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和内部的病原菌营养体的方法,而灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物,使之呈无菌状 ...

  • 微生物检测中消毒灭菌步骤汇总!

    微生物检测用的玻璃器皿.金属用具及培养基.被污染和接种的培养物等,必须经灭菌后方能使用. 一.灭菌前准备 1.所有需经灭菌的物品首先要清洗晾干,玻璃器皿如吸管.平皿用纸包装严密,如用金属筒应将上面气孔 ...

  • 消毒和灭菌有区别不?微生物检测中常用灭菌和消毒方法!

    食品实验室服务 消毒和灭菌有区别不?微生物检测中常用灭菌和消毒方法! 消毒和灭菌两个词在实际使用中常被混用,其实它们的含义是有所不同的.消毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和内部的病原菌营养体的方法, ...

  • 微生物检测过程中的细节分享(包含稀释液、培养基制作及基本操作等)!

    食品微生物检测 一.稀释液的制作 磷酸盐缓冲稀释液 贮存液: 磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g 蒸馏水500mL 用大约175 mL的lmol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2 (图1-1.1-2 ...