稳定细胞株筛选药物浓度确定方法

在使用G418、潮霉素B或嘌呤霉素筛选稳定细胞系细胞之前，需要先通过梯度实验确定适合该类细胞的最佳药物浓度。对于一些常见的细胞系，通常可以在资料中找到推荐的药物浓度。例如Hela细胞用400 μg/ml的G41或1 μg/ml的嘌呤霉素进行稳定细胞株筛选。

用G418或潮霉素B，选用在5天左右出现细胞大批死亡，2周全部死亡的浓度作为筛选浓度。对于嘌呤霉素,通常采用在3-4天杀死全部细胞的浓度。不同批次的药物活性有一定差异。因此在使用新批次药物时，需要重新测定最佳浓度。

筛选抗生素的推荐使用浓度（μg/ml）

抗生素	工作范围	常用筛选浓度	常用维持用量
G418	50-800	400-500	100
Hygromycin	50-800	200	100
Puromycin	0.25-10	0.5-5	0.25

1、在加入筛选药物前一天将细胞以50%密度接种到6孔板。第二天在培养基中按G418(0,50,1000,200,400,800μg/ml)或者嘌呤霉素（0,1,2.5,5,7.5,10μg/ml）加入。

2、用G418筛选处理5-10天。每2天观察细胞一次。每4天更换新的有抗生素的培养基（如果有必要可以更换得更勤）。直到得到最佳浓度。选择7-10天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。

3、用嘌呤霉素处理4-7天。每2天更换新的有抗生素的培养基。选择3-4天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。