多肽合成中的杂质是怎么产生的？

多肽的制备方法有生物组织提取法、基因重组表达法和化学合成法，目前已上市的多肽药物有90%以上可通过化学合成法制备。多肽药物主要由氨基酸或者氨基酸衍生物组成，可以通过氨基酸逐步连接或者多个肽链片段缩合，再经过较复杂的纯化工艺得到。目前化学合成多肽主要包括液相法、固相法、液相固相结合法。

要研究多肽合成中杂质的产生，其实最容易想到的就是工艺缺失杂质，因为固相合成的话，不可每一步都是百分之百的缩合，难免会有某些氨基酸的缺失，而且多肽链本身有可能会发生断裂，有些结构可能被修饰。

还有一类是降解杂质，比如说有的氨基酸容易发生水解，或被氧化，甚至形成聚合。ICHQ3还要求对溶剂残留与元素杂质、基因毒进行研究和控制。目前申报多肽产品的话，除了前两类杂质以外，后面的溶剂残留，元素杂质，基因毒杂质都要考虑。

起始物料的控制中，最先想的就是氨基酸，因为氨基酸里边的杂质有可能会传递到多肽的产品里边去，那怎么来控制？

多肽合成用到的氨基酸种类比较多，这里举一个例子，比如经常用的双保护赖氨酸。L型的赖氨酸，它有可能包含D型的杂质。另外，这个双保护氨基酸的制备过程当中，它可能会缺失一个保护基，还有形成一个二聚体，还有也可能引入贝塔丙氨酸，甚至这两个保护剂的位置互换，或者两个保护基都掉了。这些杂质都有可能会带入到产品里去，所以在起始物料控制的时候，需要分析这几类杂质。

刚才只是以一个氨基酸为例，但是多肽合成里面，往往会用到几种甚至十多种的保护氨基酸，那么起始物料的控制对于分析部门来说，QC就要做大量工作。

多肽合成除了从物料的源头氨基酸去控制杂质以外，还有更重要的是在合成过程中的控制。如何确保在多肽合成过程当中每一个氨基酸的缩合都完全？用的最多的是茚三酮检测法，这个反应非常灵敏的，作为一个定性的中控方法，目前是大家普遍采用的。还有其它的方法，比如TNBS法，四氯苯醌法。如果要控制更好的话，国外有用LC-MS法的，每一步的缩合反应，包括脱保护基（Fmoc）都可以得到更精确的控制。但是考虑到这个生产周期等方面的原因，国内的中控方法还是比较弱的，一般就用茚三酮检测法，或者是在关键控制点，也用LC-MS来跟踪反应是否缩合完全。正是由于在中控的地方不是那么完善，所以导致后期的纯化及在产品质量上往往面临不小的挑战。

参考资料：药融圈