为什么鉴定外泌体需要同时使用电镜、NTA和Western Blotting
细胞外囊泡是近些年的研究热门领域,细胞外囊泡主要包含微囊泡和外泌体两个大类。而外泌体是目前最受追捧的细胞外囊泡类群。它在诸如生物标志物、活性分子递送和生理病理调控中的研究报道不绝于耳,不乏诸如Nature、Science、Cell级别的重量级报道。相信很多朋友阅读过相关的论文。
朋友们在阅读论文过程中肯定发现了一个规律,无论是什么级别的杂志,外泌体的鉴定通常都是保留节目。这是因为目前外泌体的分离鉴定依旧存在较高门槛。此外,研究者制备的外泌体样品纯度和完整性还会直接影响实验结果,最终影响论文的结论。因此,外泌体的鉴定就必不可少了。
图片来源:Shedding light on the cell biology of extracellular vesicles
为什么外泌体鉴定要做电镜看形态、NTA测粒径分布、WB检测标志蛋白三个实验呢?
主要原因有二。一、因为目前外泌体的分离手段很难获得十分纯净而且单一的外泌体样品,因此要通过多种实验来评估外泌体样品的纯度和完整性;二、目前没有任何一个单一实验可以准确鉴定外泌体的存在、数量和完整性。外泌体的鉴定是为了评估研究者对外泌体分离纯化的效果,通过不同的实验评估富集的外泌体样品中外泌体的存在、数量和完整性。这是后续所有实验的必要前提。
虽然目前外泌体的分离方法可谓“八仙过海,各显神通”,但是现有的任何一种方法分离的外泌体样品都难以做到极高纯度,多多少少都会残留有非外泌体成分的杂质。比如超速离心和凝胶排阻层析都不能很好地去除血清中低密度脂蛋白颗粒,即使使用梯度密度离心也是一样。此外,诸多外泌体的分离纯化方法在操作上都相对繁琐,并且具有一定的难度。这些条件决定了研究者需要在论文中展示自己制备的外泌体样品鉴定结果,以保证后续实验确实是建立在“已经准确的分离纯化了外泌体”这一基础之上。
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