基因过表达小鼠实验构建流程

基因过表达小鼠，是指将目的DNA片段构建到过表达载体中，然后通过受精卵的原核注射，将其整合到小鼠的基因组DNA上，从而实现该DNA片段的过量表达的实验过程。

依据实验目标和转入DNA片段的不同，主要可以分为以下几种类型：

a)    过表达小鼠

主要目的是实现目的基因的过表达，其过表达载体的结构如下：

依据启动子的强弱、特异性等特性的选择，可以控制目的基因过表达的强弱和组织（器官）特异性。也可以在目的基因上加入特定的标签（Tag）或荧光蛋白（如EGFP），方便检测、示踪或纯化。

b)    RNAi小鼠

通常采用U6/H1启动子启动shRNA的表达，在基因表达的过程中，通过shRNA的干扰作用，达到对目的基因表达的沉默抑制，实现对基因功能的研究。

c)    MicroRNA小鼠

通过构建上面两种miRNA载体，可以实现过表达或者抑制。

d)    可诱导性小鼠

通过构建上述结构的载体，并通过原核注射受精卵转入小鼠体内。这种情况下，小鼠在出生和发育时，该基因正常表达。只有与CreER小鼠杂交以后，然后在Tamoxifen诱导下，Cre酶将两个LoxP之间的Stop元件切除，目的基因实现过表达。

构建基因过表达小鼠的实验流程：（2-4个月）