为什么要挑选单克隆细胞?
多克隆细胞系构建成功后由于不同细胞克隆生长速度不一致,目的基因表达量比较低的细胞克隆增殖速度一般更快,因此在最初的10代左右会观察到表达量逐渐下降,最后高表达量低增殖速度的细胞消失,低到中等表达量的细胞组成稳定表达克隆。
对于转染效率和表达效率低的细胞系,多克隆细胞筛选得到的细胞系中目的基因的表达量有可能不能满足实验要求。
单克隆细胞系在细胞克隆挑选后可以对目的基因表达量进行检测,挑选出高表达的细胞克隆进行培养。这一步骤在转染效率低的细胞株中尤其重要。
做细胞亚定位的稳定细胞系,存在表达量过低、荧光信号不够强,以及表达量过高、荧光蛋白聚集导致不能正确定位两种问题。单克隆细胞系挑选可以直接选出定位正确的细胞克隆。
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