从茶中分离叶肉原生质体和参与专门代谢产物生物合成的酶的定位分析
Isolation of mesophyll protoplasts from tea (Camellia sinensis) and localization analysis of enzymes involved in the biosynthesis of specialized metabolites
茶中的特殊代谢物(茶树)是基本的品质因素。重要的是表征体内基因功能,以鉴定参与此类代谢物生物合成的关键酶和反应。在这里,我们报告了一种瞬时表达方法,用于分析分离的茶叶肉原生质体中的基因功能。该方法是用于体内基因功能研究的传统遗传转化的替代方法。我们筛选了几种茶品种和不同的消化条件以优化原生质体分离。用3%的纤维素酶R-10和0.3%的微酶R-10消化中华新陈代谢的中白4号叶片约12小时,可产生约107个叶肉原生质体。编码参与次级代谢产物合成的酶的基因在原生质体中瞬时表达,并确定其亚细胞位置。随着转染效率的进一步提高,该瞬时表达系统将大大有助于茶中体内基因功能的分析。
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