看国外：用猪舌头监测PRRS病毒

该方案允许在生猪的所有阶段进行PRRS监测，效果良好，技术难度小，成本低。

监测母猪养殖场是否存在PRRS病毒可用于对养殖场的状态进行分类。经典的、应用最广泛的取样和分类系统是基于Holtkamp等人（2011）开发的，连续几个月每月采集一次血液样本。根据本方案出现如下情况农场被视为：

• 种母猪ELISA阴性时为阴性

• 断奶至少90天后未通过PCR检测到病毒性猪时为阳性稳定

• 当在任何组织中检测到病毒而未达到至少90天的阴性PCR结果时，阳性不稳定被认为是阳性稳定。

同时，监测可用于评估生殖性PRRS暴发后采取的控制措施的有效性。在这种情况下，最初的目标是在产仔期达到稳定，这意味着新生仔猪的所有组织中都没有病毒。第二个目标是实现断奶时的稳定性；最后，如果该农场有保育阶段，则实现保育结束时采集的样本中没有病毒。

用于PRRS监控的新型样本

在PRRS监测中仅使用血液作为唯一的样本类型，经过几年的发展，已开发了针对较大群的新采样系统，例如通过绳索收集的口腔液体，这种检测广泛用于育肥猪。最近，从睾丸液的总样本中检测PRRS病毒的新技术。Vilalta等人（2018）对趋势过程中收集的尾巴进行了研究，并取得了良好的结果。用睾丸处理液比用尾巴处理液更好。使用处理液可以对更多的动物进行采样，并且采样频率更高，这对于在动物出生时携带比例较低的情况下检测PRRS病毒非常有用。当仔猪去势率较低时，该技术不可能得到实际应用。此外，欧洲动物福利条例对常规进行的断尾的限制也限制了选择尾液作为样本的使用。

基于这些指导原则、目标和条件，来自西班牙利达的桑内贾门特猪集团的团队开发了一个项目，以评估一种新的监测技术，该技术基于收集部分死亡动物的多批样本。样品冷冻保存并以确定的频率送至实验室。通过收集和分析这类多批和连续的样本，使我们能够确定从何时开始在死动物的组织中未检测到病毒。

根据最初的结果，我们认为从死胎仔猪身上采集舌片是一个确定仔猪在出生时是否存在病毒的良好系统。

死猪的舌头组织作为诊断样本

该系统的基础是收集至少2厘米的舌头，将它们存储在冷冻的袋子或容器中，然后以所需的频率（每月或分批）发送它们。该系统显示出良好的效果和许多优点。之所以选择舌头是因为它通常比尾巴更干净，并且提供了足够的液体，并且对于死胎，还存在其他元素，例如唾液和羊水（照片1）。此外，它不需要特殊的技术培训，因此农场工人可以自己取样。

照片1.死胎仔猪的舌头。

对于哺乳，保育或育肥，使用相同的采样系统。一部分舌头来自研究期间在这些阶段死亡的动物。在这种情况下，根据死亡发生的阶段，将样品分别存储在三个容器中：保育或育肥的开始，中期或后期。

将该聚集样本冷冻保存在袋子或容器中，直至发送到诊断实验室。在那里进行处理以从舌头中存在的微量液体中提取液体。

照片2.解冻后从死胎仔猪的舌头收集液体。

用这种液体进行PCR以确定病毒的存在与否。也可以使用Sanger测序技术对病毒基因组的几个部分进行测序。

该采样系统的基本要求是：农场中有冰柜，并且在要研究的时间内要采样的动物数量足够。

该采样系统的主要优点是

• 通常，它允许以更高的频率对更多的动物进行采样。可以在哺乳期间常规收集所有死胎和死胎的舌头。

• 采样不需要复杂的技术培训。农场员工可以自己收集这些类型的样本。

• 它消除了从活体动物中采集样品带来的压力。

• 在某些情况下，通过有针对性的采样和增加的动物采样数量，可以提高该技术的灵敏度和特异性。

• Sanger测序的质量通常比口服液更好。

• 最后，与传统的每月抽血相比，疾病监测的成本更低。

使用死猪的样本监测PRRS，使我们能够在生产阶段获得重要的流行病学信息，而在生产阶段，人们就能不花很多精力来监测病毒的存在，可从分娩一直到育肥结束。

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