罗丹明/荧光素修饰标记亲和素Avidin-FITC/Avidin

亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每个分子由4个亚基组成,可以和4个生物素分子亲密结合。

荧光素(FITC)标记亲和素(FITC-Avidin)操作步骤:

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、荧光素(FITC)标记亲和素(FITC-Avidin)载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、 荧光素(FITC)标记亲和素(FITC-Avidin)挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml

LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、 按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml

培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、 取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM

作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、 分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混

匀,70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。

Avidin-FITC  荧光素修饰标记亲和素详情介绍:

中文名称:异硫氰酸荧光素标记亲和素

英文名称:Avidin-FITC

外观:液体

规格:ml

纯度:≥95%

激发波长/ 发射波:490nm/520nm

储存条件:-20℃

保存时间:1 year

应用范围:荧光激活细胞分选;组织化学染色

Avidin-TRITC  四甲基异硫氰酸罗丹明标记亲和素

中文名称:四甲基异硫氰酸罗丹明标记亲和素

英文名称:Avidin-TRITC

外观:液体

规格:ml

纯度:≥95%

储存条件:-20℃

保存时间:1 year

应用范围:荧光激活细胞分选;组织化学染色

用途:仅供科研用

产地:西安

四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC):能与细胞内蛋白质结合,比FITC稳定性好,在生理条件下对pH值变化不敏感,荧光强度受自发荧光干扰小。

Avidin-CY3

Avidin-CY5

Avidin (without modification)

Avidin-Sepharose

Avidin-FITC

Avidin-TRITC

Concanavalin A-CY5

Concanavalin A-CY3

Concanavalin A-CY7

Concanavalin A-Biotin

Concanavalin A-SH

Concanavalin A-TRITC

Concanavalin A-Sepharose

以上资料来自小编西安瑞禧生物(YQ2020.11)

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