妈呀，又白板！ ——有问题，别喊妈，先自查

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说好的CNS，PI，迎娶白富美，走上人生巅峰的诗和远方呢？

却一遍又一遍进入恶性循环，谁能传我神功破除魔咒啊？

少年莫捉急～我这有秘笈！

自查五步大法：

第一式——查抗体

一抗种属、应用、sensitivity有没有问题？CST内部未验证过的种属和应用，不推荐您使用。如Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb #3230 应用里只标注了IF-IC，若用于IF-P或IF-F是不行的。 又如JMJD3 Antibody #3457，transfected only，则不能用于检测内源表达的JMJD3。

第二式——查样本

确定所用的细胞／组织中表达您的靶标蛋白么？表达丰度如何？

查阅以下数据库：

www.biogps.org 通过mRNA表达水平给您参考估计不同样本中目的蛋白的表达水平

www.uniprot.org 了解目的蛋白可变剪切体、蛋白表达位置、可修饰类型等

www.phosphositeplus.org 蛋白质翻译后修饰权威数据库，查阅修饰类蛋白的表达条件和丰度、刺激方式等

https://www.cellsignal.com/common/content/content.jsp?id=resources-controls-table CST倾心打造的阳性对照表，为您提供全面的修饰类蛋白的刺激处理方式

第三式——查说明书

CST产品说明书中都有列举出相应的配套试剂，这些都是CST科学家经过实验反复验证后的吐血推荐，保证您得到最佳信噪比的结果。

举例：

第四式——方法互证

IHC、IF实验在做染色之前，可用WB实验验证样本中是否有表达。

第五式——终极五字诀

终极WB实验步骤五字诀，字字珠玑：

样本新鲜备，细胞传久废，

抑制各种酶，cocktail新鲜配，

裂解超声碎，或者针头怼*，

取上50微，上样前煮沸。

转膜用湿转，选膜选NC，

封闭用牛奶，不用BSA，

抗体使用前，说明书详看。

白板不可怕，白了别喊妈，

问题再复杂，一步步自查。

*针头怼：指用移液枪进行上下吹打进行破碎