动物抑郁行为实验之小鼠CSDS模型的建立及检测方法

小鼠CSDS模型的建立及检测方法

一. CSDS模型的定义

CSDS的全称是chronic social defeated stress，又称慢性社会挫败应激模型，是一种用来制作动物抑郁模型的方法

二. CSDS模型的造模方法

该部分实验内容是参照了有关文献。首先根据需要选取一定数量的CD 1小鼠作为攻击性小鼠，在正式实验前2-3周开始对其攻击性进行筛选。具体方法就是:每个饲养笼中饲养雄性和雌性两只周龄相近的CD1小鼠，一定时间内让CD1雄性小鼠产生领地意识；1周以后，将配对饲养的雌鼠分离出饲养笼，随机放入一只陌生的C57小鼠作为领地入侵者，如果CD1雄性小鼠在1 min之内就开始对C57小鼠发动攻击，那么该CD1小鼠则被视为攻击性CD1小鼠。运用同样的方法筛选出所有需要的攻击性雄性CD1小鼠。正式实验前，选取雄性C57小鼠(7周)，随机分配成正常组和应激组，每组10只，对照组每2只一笼，其余均单笼饲养，给正常饮食饮水一周充分适应环境。当实验开始时，提前分离CD1雌鼠，取模型组C57小鼠一只，直接放入陌生雄性CD1小鼠（8-9周）饲养笼中，使C57小鼠遭受雄性CD1小鼠持续性攻击约5-10 min;然后将两只小鼠用带有密集小孔的透明塑料隔板隔开，使两只小鼠彼此仍能互视和闻嗅但是无法接触，运用这种方法持续到下次进行攻击前为止，完成该过程后即为第一天应激。第二天再将该C57鼠放入另一不同的CD1雄性鼠的笼中，使C57小鼠受到相同程度的应激;第三天再放入第三只CD1雄性鼠的笼中，同样使C57小鼠受到同样程度的应激。如此连续应激10天，并保证每天同一只C57小鼠受到不同CD1雄性鼠的攻击。在此期间，对照组和应激组C57小鼠均维持正常饮食饮水，而对照组则保持2只一笼，每天相互更换接触不同的小鼠。

三. CSDS模型的检测方法

10天连续应激结束后即开始行为学测试。常规的抑郁样行为检测实验方法有糖水偏好实验、强迫游泳实验、悬尾实验、高架十字迷宫实验、O迷宫实验、明暗箱实验等。这里重点介绍根据糖水消耗，社会接触的行为学和悬尾测试的结果将C57小鼠分为正常组，抑郁敏感组，抑郁非敏感组。

1.糖水偏好实验

糖水偏好测试是检测抑郁症快感缺失的经典方法。测试前用自来水配制好1%蔗糖水，与不含蔗糖的正常自来水同时放在C57模型鼠的鼠笼处，保证其自由饮用，同时提供充足的鼠食，每12h将糖水和白水互换位置，以防止C57模型鼠产生位置偏好。到第三天将所有的水和食物同时撤走，将C57模型鼠禁食24 h。禁食结束后分别称量糖水和白水的重量并记录，然后将两瓶水随机放在饲养笼上供模型鼠自由饮用，1h后取下两瓶水分别测量两瓶水剩下的重量，计算出糖水消耗重量A和白水消耗重量B，利用公式A/（A+B） X 100%即得到CSDS模型鼠的糖水偏好率。糖水偏好率的值与动物的快感程度呈正相关，其值越小则表明动物快感缺失越严重。

2.社会接触实验

该实验方法主要用于检测小鼠对陌生目标的靠近，探索和躲避行为。正常的啮齿类动物是社会性动物，当正常鼠与陌生鼠相遇后会与陌生鼠频繁接触;而遭受过社会挫败应激的小鼠则会产生孤立和逃避接触的行为，该行为一般判定为抑郁样行为;而相比之下，在一定的时间内，正常鼠在单位时间内与正常鼠接触的时间明显长于模型鼠在单位时间内与正常鼠接触的时间，因此，在规定时间内计算出模型鼠与攻击鼠接触的时间能反应出模型鼠的抑郁程度。其具体操作方法是:在敞箱(45 X 45 X 45 cm)一侧的中央放入隔板(10 x 6 cm，底部有密集小孔，用来放置陌生CD1小鼠)，以中央放置CD1小鼠的区域为中心，划出一矩形区域作为接触区域(14 x 26 cm ) }46}。结果通过由上海欣软信息科技有限公司公司提供的VisuTrack软件进行接触时间的统计。整个实验步骤如下:

（1）打开软件和摄像头后将实验笼放置到合适的位置，然后进行软件的设置;

（2）不放入陌生的CD1小鼠，然后放入C57小鼠，然后开始计时，时间设定为2.5 min

最后得到接触区和非接触区的累积时间，此阶段为Target absent;

（3）放入陌生的CD1小鼠，然后放入C57小鼠，然后开始计时，时间设定为2.5 min

最后得到接触区和非接触区的累积时间，此阶段为Target present;

（4）分别统计对照组和模型组的Target absent和Target present的累积时间，在Target

absent阶段，对照组和模型鼠无明显差异，但是在Target present阶段，模型鼠的

接触时间明显降低。

3.悬尾实验

将高60 cm的架子放置于安静的实验环境中，用夹子夹住小鼠尾巴末端1 cm处，然后将夹子固定在架子上，使其倒吊于架子上，小鼠为克服不正常体位而挣扎活动，在此期间采用上海欣软VisuTrack动物行为学分析软件记录小鼠的不动时间。总共时间为6 min，开始1 min为适应时间，随后5 min为记录时间。