HPLC实验报告

色谱分析是指按物质在固定相与流动相间分配系数的差别而进行分离、分析的方法。其按流动相的分子聚集状态可分为液相色谱、气相色谱及超临界流体色谱法等。按分离原理可分为吸附、分配、空间排斥、离子交换、亲合及手性色谱法等诸多类别。按操作原理可分为柱色谱法及平板色谱法等。

高效液相色谱指流动相是液相的色谱分析，柱中高压是为了加快流动速度，抑制扩散。通常包括：液路系统、进样系统(采用高压输液泵)、分离系统(采用高效固定相)、检测系统(采用高灵敏度检测器)、记录系统。HPLC 最常用的检测器是紫外检测器，有紫外吸收的样品可以用该方法检测。对于相同物质，峰积分面积与物质含量成正比，因此通过绘制标准曲线（我们这里采用的方法）或者内标法、外标法，可以用来定量分析。同类物质在 HPLC 中具有固定的保留时间，因此可以用来定性。常用的固定液有β,β'-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEG400～4000)、三甲撑乙二醇(TMG)和角鲨烷(SQ)。采用与气相色谱(GC)同样的方法，将固定液涂渍在多孔的载体表面，但在使用中固定液易流失。目前，应用较多的是键合固定相。在这种固体相中，固定液不是涂在载体表面，而是通过化学反应在纯硅胶颗粒表面键合上某种有机基团。例如，利用氯代十八烷基硅烷与硅胶表面的羟基(-OH)之间的反应就可以形成一烷基化表面。