单基因泛癌如何补实验?
有的朋友有实验条件,想在单基因生信的基础上补实验,发的更好一些,也有的朋友担心审稿人会要求补实验,那么我们的单基因泛癌如何补充实验验证呢?
首先生信分析的内容详见下面链接
假如你是研究肺癌的,首先给你筛选的基因在肺癌中的结果必须是比较好的。
组图原则就是泛癌的结果包含你的肿瘤,结果都比较好的话,就展示泛癌结果;在只能展示一种肿瘤结果的时候,就只展示你研究的肿瘤结果;写文章的时候着重介绍你的肿瘤中的结果
比如到富集分析的时候,就不用展示多种肿瘤的GSEA结果,而是可以换成展示单个肿瘤的多种富集分析结果。咱们的结果中有GO(BP MF CC),KEGG, GSEA-GO,GSEA-KEGG,GSEA-Reactome,GSVA。这里还可以加上这个基因在肺癌中的正相关热图和负相关热图。
那么补实验要做哪些实验呢?
如果这个基因比较新,在你研究的肿瘤中没有研究过或者很少,那么验证表达是必然的,如果这个基因在你的肿瘤中研究过很多了,那么单纯验证表达是没有意义的,肯定要有一些新的东西。大致的实验思路如下
1 肿瘤组织 vs 正常组织 通过免疫组化,WB, PCR验证表达(如果你的组织有生存资料,再做生存分析)
2 在第一步中,不仅仅只检测靶基因,把结果中比较重要的基因同时检测。比如这个基因与免疫检查点相关性好,你就多检测免疫检查点,再计算相关性。比如跟巨噬细胞相关性好,你就再检测CD206,CD163,TGFB1等等,计算相关性,比如跟Treg细胞相关性好,你检测FOXP1等标志基因,以此类推。
3 体外实验表型研究--增殖,侵袭,凋亡,细胞周期等等
4 体外实验机制研究--这方面看你研究深度如何。简单点,可以在富集分析中找一些明星通路来研究,复杂点,就需要研究直接结合,互作修饰等等。
5 体内实验验证表型以及机制
6 对于免疫部分,我们筛选的基因大都是与免疫浸润相关。验证的方式最好是用含有免疫系统的小鼠,例如C57,通过鼠源肿瘤细胞过表达/敲低鼠的目的基因,成瘤后检测肿瘤大小以及通过流式检测免疫细胞浸润的状态,看这个基因对免疫细胞浸润的影响是否于生信结果一致。当然了,各种marker基因都可以检测。
如果你发现在裸鼠中敲除这个基因不影响肿瘤大小,而在C57中影响肿瘤大小,那么这个基因大概率是通过免疫系统影响肿瘤的,恭喜你十分的文章有希望了。
7 如果上述免疫部分结果较好,可以考虑做一下与免疫抑制剂连用的效果评价
8 针对耐药分析的结果,有相应的耐药细胞株当然最好。如果没有的话,只能将就一下,过表达/敲低基因的细胞用特定药物处理,看基因是否对药物杀伤有促进或者抑制的作用。
9 等等等等
整个过程下来没有几十万的经费以及至少一两年时间是做不完的,就不算写作投稿修回的时间了。当然了,做到什么程度还是取决于自己。
而现在纯生信做的好还是可以发3-7分之间,省时省力省钱。
被致谢!2021年7分+单基因泛癌纯生信,投稿到接受30天!
单基因生信又发准7分SCI,放到以前不敢想,现在一切皆有可能。
单基因干湿结合发准7分SCI,2个月接收,有实验条件的可轻易模仿
有人说杂志水,可不是么。不水的高分杂志有这么容易投?
趁这两年生信为主的文章比较好发,抓紧吧。