细胞周期实验注意事项

细胞周期实验注意事项

1. 一定要用纯水配置70%乙醇，PBS有盐析出会对细胞造成物理性伤害。

2. 与抗体抗原结合不同，核酸染料与DNA的结合是一种结合状态和游离状态之间的松散平衡，并不牢固，因此离心洗涤会破坏PI的结合，造成荧光强度下降，因此染料孵育完之后不要进行细胞清洗。

3. 上机时，荧光通道设置为线性（lin）放大。

4. 需要排除粘连体（使用A,H和W其中两个参数）。

5. 上样浓度设置在5*10^5-1*10^6，进样速度为低速，样本在1h内上机，否则CV值会增加。

6. 对于有GFP的细胞，乙醇处理容易导致GFP破膜后溢出，可以先用0.5%多聚甲醛固定15min之后再用乙醇固定。

7. 在加入乙醇过程中如果出现了絮状物，则说明细胞状态差，或者制备过程中出现了细胞损伤，有DNA释放缠绕细胞，造成团块，需要重新制备样本。