利格列汀提高了服用二甲双胍和/或胰岛素的2型糖尿病慢性肾病患者的CD34 内皮祖细胞

研究背景

内皮祖细胞（Endothelial Progenitor cells，EPCs）在2型糖尿病（T2DM）和慢性肾脏病（CKD）中均表现为功能失调，导致内皮细胞再生和肾脏灌注不良。EPCs已被证明是一个强有力的心血管疾病（cardiovascular disease ，CVD）风险指标。DPP4抑制剂如利格列汀等对已确诊CKD的T2DM患者CVD风险的细胞机制尚未明确。利格列汀，一种DPP4抑制剂，当与胰岛素、二甲双胍或两者同时使用时，可能改善糖尿病肾病（DKD）人群的内皮功能障碍。

研究方法

31 名服用二甲双胍和/或胰岛素的受试者参加了这项为期12周的双盲、随机安慰剂匹配试验，服用5 mg利格列汀和安慰剂对照。纳入2 型糖尿病受试者（30-70岁）、糖化血红蛋白(6.5-10%)、CKD 1-3 期。检测CD34 细胞数量、迁移功能、基因表达以及动脉硬化、生化、静息能量消耗和机体成分等血管参数。分别于0、6、12周收集数据，进行混合模型回归分析，p值＜0.05存在统计学差异。

研究结果

通过流式细胞仪检测，利格列汀组CD34/CD184双阳性细胞计数较对照组升高且有统计学意义(P＜0.02),其中CD184是基质衍生因子（stromal derived factor，SDF1a）的细胞表面受体。虽然CD34 细胞中的mRNA差异更为明显，但CD34-细胞mRNA分析显示出抗氧化剂(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶)和显著的内皮标志物(PECAM1、VEGF-A、vWF和NOS3)增加。利格列汀组动脉僵硬指数(Arterial Stiffness ,AI)、脉搏波分析(Pulse Wave Velocity，PWV)等指标改善（硬度降低）(P＜0.04)。治疗组低密度脂蛋白/高密度脂蛋白比值明显降低(P＜0.04)。检查足细胞健康的尿液外泌体蛋白（podocalyxin、Wilms tumor和nephrin）均有减少或改善。

图 1 内皮祖细胞(CD34 )、CD34 CD184 细胞的表达和迁移。流式细胞术检测CD34阳性细胞和CD34 CD184双阳性细胞。a 利格列汀组从第1次访问增加到第3次的平均CD34细胞数。b CD34 CD184双阳性细胞(CXCR4)的表达有统计学意义(p＜0.02)，进一步支持CD34 细胞功能的改善。尽管曲线在第三次检查时重合，但安慰剂组的双阳性率从第一次检查到第二次检查出现了下降，在利那利普汀组中，双阳性率有所上升。c显示了平均荧光强度(归一化以对照样本)。在第3次随访时，利格列汀组观察到cd34 细胞对趋化因子sdf1α(100 ng/ml)的迁移反应增强的趋势。

表 1基线特征和人口统计学数据

图 2  内皮标志物和抗氧化剂基因表达明显增加。a 安慰剂和利格利汀组患者的第3次随访时的血管内皮标记物PECAM1、VEGF-A和vWF基因在CD34阴性细胞上的表达。b 安慰剂和利格利汀组患者的第3次随访时的抗氧化性标记物，如过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶-2或锰超氧化物歧化酶(SOD2)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX3)在CD34阴性细胞上的基因表达。

图 3 通过蛋白质印迹鉴定的尿外泌体标志物podocalxyin、Wilm's Tumor和Nephrin。从第 1 次到第 3 次随访，利格列汀组中的所有三个标志物都有所下降，表明足细胞健康状况恶化得到改善，而在安慰剂中，趋势则是一条平坦的线或增加。

图 4 微量白蛋白与肌酐的比率。在第 1 次和第 2 次随访，利格列汀和安慰剂线轨迹相似，但是在第 2 次和第 3 次访问，线轨迹急剧下降，尤其是利格列汀组。可能表明利格列汀在 12 周逐渐改善肾功能。此观察结果（p 值）在统计上不显着

表 2 利格列汀治疗前后的血液生化指标

图 5 Hba1c在安慰剂组相对稳定，但在治疗组有明显的下降趋势

图 6 动脉硬度参数。a 脉搏波速度：在第 1 次随访时，利格列汀组的 PWV 较低，处于显着水平 (p = 0.06)。在第2次随访时，没有差异（p = 0.91）。在第 3 次随访时，利格列汀组的 PWV 显着降低（p = 0.03）。与对照组相比，利格列汀组从第 1 次到第 2 次随访PWV 增加更多，从第 2 次到第 3 次随访减少更多。b 脉搏波分析：此处可以看到类似的模式（将 PWV 与 PWA 进行比较）。第 1 次到第 2 次随访，利格列汀组比安慰剂组增加更多，但随后在第3次随访时比对照组回弹更多

研究结论

1

利格列汀与二甲双胍和/或胰岛素一起加入T2DM和CKD患者的治疗时中时，通过增加CD34/CXCR4的阳性表达，改善了CD34 内皮祖细胞的迁移功能。并且可以改善动脉僵硬参数、血脂和糖化血红蛋白水平。

2

12周的利格列汀疗法可能会改善足细胞的健康状况。

3

CD34 细胞可以作为评估内皮功能的有价值的生物标志物，相关的尿外泌体分析可以帮助阐明和预测肾功能的改善。这两个生物标志物可以帮助提供有价值的临床信息，从而做出适当的治疗选择。

参考文献

Awal HB, Nandula SR, Domingues CC, Dore FJ, Kundu N, Brichacek B, Fakhri M, Elzarki A, Ahmadi N, Safai S, Fosso M, Amdur RL, Sen S. Linagliptin, when compared to placebo, improves CD34 ve endothelial progenitor cells in type 2 diabetes subjects with chronic kidney disease taking metformin and/or insulin: a randomized controlled trial. Cardiovasc Diabetol. 2020 Jun 3;19(1):72. doi: 10.1186/s12933-020-01046-z. PMID: 32493344; PMCID: PMC7271387.

-The End-

文字|陆放

编辑|金鑫 潘艳艳【江苏省人民医院肾内科】