精准医学:NGS和MFC方法在多发性骨髓瘤MRD评估中的比较|预后监测

易点评

在实体瘤的治疗中微小残留病(Minimal Residual Disease, MRD)是指恶性肿瘤经过治疗后体内残留的微量肿瘤细胞的状态,是肿瘤复发的根源。MRD的水平一般比较低,需要用敏感性和特异性都非常高的方法来进行检测。因此准确的MRD检测是对患者进行个性化精准治疗的基础。目前,MRD检测技术发展迅猛,常用的检测手段众多,其中包括:针对基因突变的多重PCR;新型标志物的应用,比如甲基化标志物;NGS免疫组库技术以及分子生物学多重QPCR手段。本文则是以多发性骨髓瘤(MM)微小残留病(MRD)的免疫表位检测为案例,针对下一代测序免疫组库技术(NGS)和多色流式细胞术(MFC)方法进行了系统比较。用NGS和MFC方法对125例MM患者的骨髓标本进行MRD分析,计算出肿瘤负荷(TL)、检出限(LOD)和定量(LOQ)。最终得出了,在10−5的阈值下肿瘤和非肿瘤细胞之间的MRD状态和肿瘤负荷之间有很好的一致性这一结果,但并未系统的评价这两种手段的优势和不足。因此,虽然这篇文章在对这两种检测方法的总体评价上略有不足,但仍为MRD在实体瘤的应用尤其是多发性骨髓瘤的检测上作出了贡献。

背景

微小残留病(MRD)被定义为在治疗过程中或治疗后持续存在的少量恶性细胞,不能通过血清或细胞学方法检测到。目前基于检测免疫表位原理的用于检测多发性骨髓瘤(MM)MRD高灵敏度的方法包括下一代测序(NGS)和多色流式细胞术(MFC)。NGS是以超深靶向测序的形式,使用通用引物来针对免疫球蛋白的DNA序列,也就是免疫组库的方法。在MFC中,是通过肿瘤MM细胞与正常浆细胞相比表现出的异常免疫表型来识别恶性细胞的。基于对样本质量和样本处理情况的要求,两种MM MRD检测方法都需要达到每1,000,000个骨髓细胞(106)中能检测出1个肿瘤细胞的灵敏度。

在多发性骨髓瘤中,残留的肿瘤细胞被认为是复发的主要原因。因此,MRD诊断为预后和治疗效果提供了最有力的预测指标之一。大量研究和meta分析表明,治疗后MRD是否呈阴性与MM患者的总体生存率(OS)有关。MRD检测作为治疗的终点可能会加快药物监管审批,从而加快MM药物的开发速度。此外,一些最新数据表明,MRD检测能够在常规临床实践中作为疾病和生物标志物的监测工具。美国食品和药物管理局(FDA)最近批准了第一个NGS检测方法,用于检测BM多发性骨髓瘤患者的MRD。除了需要更灵敏的MRD分析和临床试验来研究MRD阴性的影响之外,目前实验室的一些关键指标必须还以标准化的方式进行评估和报告。

结果

样本量会直接影响特定MRD结果的评估和比较

为了比较NGS和MFC的检测结果,作者对125例患者样本进行了评估,这些样本在相同的治疗时间点分别由这两种MRD检测方法进行检测。为了评估NGS和MFC分析的质量,作者统计了一些关键指标(图1、2)。

图2

NGSMFCMRD结果符合率接近70%

当MRD的阈值为1×10-5时,阳性符合率为33.6%(n=42),阴性符合率为34.4%(n=43),总符合率为68.0%(n=85)。NGS MRD阳性/MFC MRD阴性和NGS MRD阳性/MFC MRD阴性这种不一致的结果占11.2%(n=14),总不符合率为22.4%(n=28)。两种方法中由于LOD造成的不一致结果的占比预计为9.6%(n=12;图3)。因此除去两种方法中因LOD引起的不一致结果,这两种方法一致性的科恩kappa系数(κ)为0.536(n=113,p<0.001)。

图3

两种检测得到的MRD结果均符合血清学反应

为了评估MRD的结果是否可信,我们分别计算了在MRD阈值为1×105时,每次检测的MRD阴性病例和阳性病例的比例,以及血清学状态。结果显示,两种技术获得的MRD检测结果与血清学反应完全一致(表1)。

表1

MRD阳性病例的T细胞负荷与这两种检测结果相符

在MRD阈值为1×10−5时分别对58例和56例NGS/MFC MRD阳性病例进行比较,比较两种方法的异常细胞/细胞的数值。这些病例的中位TL分别为1.5×10−4(1.1×10−5~4.5×10−2)和1.0×10−4(1.4×10−5~3.3×10−2)。NGS和MFC评估的TL之间无统计学差异(p=0.11)。对42个一致的MRD阳性样本的TL进行Pearson相关分析,结果显示NGS与MFC的相关系数为0.47(n=42,p<0.01)。除去MRD阳性样本中的两个极端异常值,相关系数被修正为0.8,表明有良好的相关性(n=40,p<0.001)。此外,在不同的反应类别中,由NGS和MFC评估的TL之间没有发现显著差异(p>0.05)。

结论

综上所述,作者的研究表明,在10−5的阈值下,肿瘤和非肿瘤细胞之间的MRD状态和肿瘤负荷之间有很好的一致性。然而,总分析样本的数量以及由此产生的LOD值和LOQ值可能会显著影响进行MRD最适分界点的选择,因此一些无法评估的病例的存在是可以允许的。

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