温度与TRIS-HCL缓冲液PH值的关系

TRIS-HCL缓冲液很稳定，可被广泛用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备，它的生理体液的相容性好，与钙，镁离子不会形成沉淀,相反，磷酸盐与钙、镁离子会产生沉淀。而且相同pH、相同浓度的TRIS-HCL缓冲液的离子强度比磷酸盐缓冲液的离子强度低。这对酶类测定尤为重要。因为大离子强度易致有些酶失活。因此，有时用TRIS-HCL代替磷酸盐缓冲液，效果更好。

但TRIS-HCL缓冲液的pH受温度影响大。一旦温度改变，PH将发生明显变化。而致酶活性改变，这一问题尚未引起临床检验界足够的注意。为此，我们对TRIS-HCL缓冲液的温度系数进行测定并对实用价值作初步讨论。下面实验中用到的Tris试剂为德生科技公司所研发生产。

实验过程：将TRIS-HCL缓冲液放人37℃水浴箱中水浴30min。蒸馏水，定标液仍置于室温中。将温度旋钮置于37℃，取出平衡温度后的缓冲液。以室温下的蒸馏水调零，室温下的混合磷酸盐定标(37℃时pH为6。84)，立即测定TRIS-HCL缓冲液的pH。缓冲液置室温中待温度降至23℃时。以室温的蒸馏水调零。室温的混合磷酸盐定标(23℃时pH为6。86)，再立即测定其相应的pH。溶液继续置室温中。待温度降至室温对。再调温度旋钮。定标并测定室温时的pH。

实验结果：按照以上方法测得37℃的pH比23℃的pH平均低0。18。比l2℃时的pH平均低0。32，温度变化对缓冲液pH值的影响很大，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃～4℃。

可见，TRIS-HCL缓冲液的pH受温度变化影响较大，用不同方法测定时，变化值不同，两种温度 (37℃，23℃) 的 pH 值变化，跟测定方法没有太大关系，故我们推测，若要测定溶液在某温度下的pH值。必须不仅将酸度计的温度补偿值也要将所有各种溶液及蒸馏水一并调节到测定温度。