杆状病毒转移载体是什么？

杆状病毒载体系统广泛应用于昆虫细胞中表达重组蛋白，它是真核表达重组蛋白最通用和最强大的系统之一。该系统特别有利于在真核宿主细胞中大规模制备重组蛋白。许多真核生物蛋白的翻译后修饰只能在真核细胞中发生（例如糖基化），或者需要真核细胞环境来进行正确折叠（例如膜蛋白质），而原核蛋白表达系统却没有这些功能。

杆状病毒是一种双链DNA病毒，通常会感染昆虫，特别是鳞翅目昆虫（moths, butterflies and skippers）。克隆载体pBV是经优化的，可与来自AcMNPV（Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus）的穿梭载体（称为Bacmid）一起使用，该穿梭载体的野生型基因组大小为134 kb。

首先将目的基因克隆到含有强启动子的pBV载体上，目的基因表达盒与庆大霉素抗性基因的侧翼序列为Tn7转座子末端元件Tn7L和Tn7R。然后，将该载体转化到携带Bacmid穿梭载体和辅助质粒的大肠杆菌中。Bacmid穿梭载体是一个非常大的质粒，含有经修饰后携带lacZ基因的杆状病毒基因组和插入lacZ基因编码区的mini-attTn7位点。辅助质粒可以表达Tn7转座酶，由转座酶介导pBV载体上Tn7R和Tn7L的之间的区域转座到mini-attTn7位点，Tn7R和Tn7L的之间的区域是目的基因和庆大霉素抗性基因的表达盒。通过庆大霉素筛选和蓝/白筛选鉴定出重组的阳性克隆（由于lacZ表达，非重组菌落为蓝色，而由于转座子插入破坏lacZ，重组菌落为白色），纯化的重组Bacmid DNA可用于转染昆虫细胞以产生活的杆状病毒，进而产生目的重组蛋白。

最常用的杆状病毒重组蛋白表达细胞系是Sf9，来源于草地贪夜蛾（fall armyworm）的卵巢组织。该细胞系适用于各种培养条件，包括悬浮或单细胞培养以及无血清培养基。幼虫和其他鳞翅目细胞系也被广泛使用，也有一些关于杆状病毒可应用于哺乳动物细胞的报道。