ECL发光试剂-鲁米诺

鲁米诺luminol是较早使用的化学发光底物，像鲁米诺发光液、ECL、异鲁米诺试剂、ABEI、AHEI、ITCI等都是以鲁米诺或者鲁米诺的衍生物为基础的化学发光免疫分析试剂。其中ECL发光试剂是以鲁米诺为基础的应用较多的一种试剂。

发光氨鲁米诺是传统的发光底物，由此制得的ECL化学发光检测试剂，比鲁米诺发光性能更好，属于新一代增强型化学发光底物试剂，可与二抗上偶联的POD或者辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase，HRP)催化发生化学反应而发出荧光结果可以通过X光片压片和其他显影技术展现或使用Luminometer检测。

鲁米诺极其衍生物试剂ECL化学发光分析

由鲁米诺制得的ECL超敏发光液衰减较慢，15min内荧光几乎不会减弱，干扰少检测时产生的非特异背景非常低，可以减少抗体和待测样品的用量，该试剂可用于PVDF膜和NC膜(硝酸纤维素膜)的Westernblot免疫印迹等印迹发光显色。

蛋白或核酸底物用辣根过氧化物酶HRP标记后即可用ECL直接或间接检测，有着极高灵敏度和高信噪比，可检测10-100 fg抗原(#P1010)；其发光迅速且属于长时间辉光型，荧光可使X光胶片感光长达12小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测。同时该试剂允许使用更高的抗体稀释倍数，(1:2000-1:10000)，极其节省抗体。

ECL 发光液使用时有几点需注意：

1. ECL使用时前面步骤可在日光下进行，但曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，戴手套可以避免在膜上留下手印。

2.曝光过长或蛋白过量，背景会加深并使条带强弱变化失去线性关系，而曝光不足则条带模糊。

3.发光工作液孵育约1分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能仅用肉眼观察判断条带发光时间。

4.抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，从而导致失败!