新冠检测，如何控制核酸污染

来源：小桔灯网

临近春节，《冬春季农村地区新冠肺炎疫情防控工作方案》要求返乡人员需持7天内有效新冠病毒核酸检测阴性结果返乡，返乡后实行14天居家健康监测，期间不聚集、不流动，每7天开展一次核酸检测。此外，医院与食品检测机构也开展了场地、食品、外包装等的新冠核酸检测，以监控新冠传染途径。

在大规模新冠核酸检测中，出现了少量假阳性的误报。这些假阳性报告会给新冠监控带来错误的指导，一旦错误采取隔离/封闭措施，极大干扰相关企事业单位的正常运营。检测前后及处理花费的人力和物力也浪费社会资源，挤占了原本可用于正确防控的资源。

这些假阳性结果大部分是由核酸污染造成的，其来源主要有：1、PCR产物污染；2、克隆质粒污染；3、样本污染；4、试剂污染。PCR会将极少量新冠基因进行指数复制，操作不当时，这些被大量增值的新冠核酸会以气溶胶形式被释放出来，污染整个实验室。在进行质粒克隆和抽提时，高浓度质粒容易以气溶胶形式污染实验室。采样样本处理/放置不当时，被其他样本或气溶胶污染。检测试剂生产或使用不当时，被气溶胶或其他方式污染。

（见扩展阅读：美国CDC检测试剂盒污染；灭活病毒暴露污染样本；核酸检测气溶胶污染）

核酸污染预防：

1、设置合理的实验室布局，一般可分为1）试剂准备区，2）样本制备区，3）核酸扩增区，4）产物分析区，qPCR这类不需要电泳分析的可将产物分析区与核酸扩增区合并。

2、每个步骤都在相应的实验区进行，每个区域内实验器材、物品不能共用，每个区完全隔离和独立通风，控制空气流动方向。如条件不足，也必须将扩增区和分析区与试剂准备和样本制备区隔离。最后废弃物处理区必须远离以上实验区。

3、实验人员、物料须严格单向流动，即只能从准备区到扩展区和分析区，避免产生交叉污染。

4、定期进行阴性质控检测，在大规模检测时，必须添加阴性样本，阴性对照品，无模板对照，保证出现污染时可立即发现。

5、使用封闭扩增的检测方法，如荧光定量PCR，并在扩增完成后不能打开试管。普通PCR和一些等温扩增方法需要开盖，很容易产生气溶胶污染。（Novoprotein 荧光定量PCR，Cat.E096/E094）

6、实验管理操作严格规范：在通风橱/超净工作台操作，实验前/后即时擦拭、清洁、消杀实验台，实验中使用一次性手套，如有污染可能，立即替换手套，移液枪吸取液体轻柔，轻轻吹打，避免飞溅，打开管盖时动作轻缓，漩涡震荡后，离心甩下液滴。使用带滤芯枪头，避免液体被吸入移液枪，所有实验物品尽可能提前分装成小包装，并预先灭菌和分装好。实验废弃物统一处理。

7、使用dUTP+UDG酶防污染体系：在PCR中使用dUTP部分代替dTTP，使PCR产物中掺入U。在第二次PCR扩增前，使用UDG酶处理PCR反应液，可打断上一次PCR产物中的U，使其无法污染第二次PCR扩增。（Novoprotein 热敏UDG，Cat.E063）

核酸污染处理：

发现核酸污染，立即暂停相关实验/检测，对实验场所、仪器设备进行彻底的清洁/消杀/去核酸处理，更换相关试剂、耗材，实验人员更换衣物并进行核酸去除。

常用的核酸污染去除方法有：紫外照射、酒精擦拭、通风等。紫外照射可打断核酸，但对打断小于200bp的片段效果不佳。酒精无法消化核酸，擦拭抹去表面核酸时容易残留。通风可将空气中气溶胶排出，但无法清除表面残留，而且需要很长时间。

因传统的核酸污染去除方法并不能完全去除核酸污染，《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行）》指出，为避免气溶胶等核酸污染造成的检测假阳性，可采用核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸。

Novoprotein核酸污染去除剂（Cat.M126）降解所有核酸，完全清除掉核酸污染：

使用不同方法去除核酸污染，再进行qPCR扩增检测，M126完全消除核酸

M126完全消除DNA及RNA

核酸污染是实验室、生产车间常见的污染事故，严重时会导致实验室、生产车间封停整顿。在新冠疫情之下，每一个核酸检测阳性都会被极度重视，并采取更严格的处理措施，一旦相关单位被检测出假阳性，将面临全面检测排查和停业整顿以及人员隔离检测，会严重影响相关单位的运营，也浪费了疾控中心、检测机构、排查/隔离/封锁单位的人力和物力。所以必须重视核酸污染，并且采取切实有效的手段预防、控制和处理核酸污染。

相关产品：

荧光定量试剂：E096/E094

热敏UDG酶：E063

核酸污染清除剂：M126