自噬的研究方法
正常培养的细胞自噬活性很低,不适于观察,因此,必须对自噬进行人工干预和调节,经报道的工具药有:
(一)自噬诱导剂
1)Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模拟内质网应激
2)Carbamazepine/ L-690,330/ Lithium Chloride(氯化锂):IMPase 抑制剂(即Inositol monophosphatase,肌醇单磷酸酶)
3)Earle's平衡盐溶液:制造饥饿
4)N-Acetyl-D-sphingosine(C2-ceramide):Class I PI3K Pathway抑制剂
5)Rapamycin:mTOR抑制剂(这是最常用的)
6)Xestospongin B/C:IP3R阻滞剂
(二)自噬抑制剂
1)3-Methyladenine(3-MA):(Class III PI3K) hVps34 抑制剂
2)Bafilomycin A1:质子泵抑制剂
3)Hydroxychloroquine(羟氯喹)
除了选用上述工具药外,一般还需结合遗传学技术对自噬相关基因进行干预:包括反义RNA干扰技术(Knockdown)、突变株筛选、外源基因导入等。
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