QPCR检测实验流程

qPCR背景介绍

在实时荧光定量PCR中，对每一轮循环的荧光信号强度进行监测并记录，随着反应的进行，监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线，即为扩增曲线。一般而言，扩增曲线可以分成三个阶段：基线期（Baseline phase），指数增长期（Log-linear phase）和平台期（Plateau phase）（图一）。在扩增早期即基线期，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系，所以根据最终的PCR产物量不能计算出初始模板量。只有在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，可在此阶段进行定量分析。

流程图