产品|021期-PCR实验室的污染来源及控制策略
来源：IVD从业者
作者：锁炎
污染的来源
（１）试剂污染
由于在PCR试剂配制过程中，由于加样器、容器、水及其他溶液被核酸污染。
（２）设备污染
半自动核酸提取仪、全自动核酸提取仪在提取过程导致溅洒样本或者核酸模板，污染机器。或者设备内垃圾筒清洁不彻底，残留液体或结晶挥发形成气溶胶对造成污染。
（３）标本交叉污染
可能是由于收集标本的容器被污染，标本放置时由于密封不严溢于容器外，容器外黏有标本，吸样器污染及空气中的气溶胶导致的标本间交叉污染。尤其是病毒类可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。
（４）PCR扩增产物污染
这是PCR中最常见的污染问题，常见于需要在扩增后开盖的检测项目，或者是扩增后产物处理不当，因为PCR产物拷贝量大，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染就可形成假阳性。
（５）克隆质粒的污染
在实验室操作中经常会用到阳性参考品，这些阳性参考品大多数是由某些用克隆质粒制作而成，克隆质粒在单位容积内浓度高，不小心使用极易造成污染。
有些实验室自己克隆质粒做质控品，配制过程后，垃圾的处理方式不严格等，从而造成质控品对实验室的污染进而造成实验室对标本的污染。
控制污染的措施
（1）实验分区域
合理分隔实验室。将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行，特别注意标本处理及PCR产物的鉴定应与其他步骤严格分开。
最好能划分：标本处理区，PCR反应液制备区，PCR循环扩增区，PCR产物鉴定区。其实验用品及吸样枪应专用。
实验前应将实验室用紫外线消毒以破坏残留的 DNA 或RNA.
(2) 各区物品不得混用
各个实验区域要对不同设备、物品颜色有明显的标记，如各区域使用专门的工作服、工作鞋、垃圾桶、拖把、抹布、笔等，避免不同工作区域内的设备、物品混用。
使用一次性用具吸头、离心管、无粉尘手套、口罩等
（3）设置规范的空调通风系统
尽可能采用全送全排空调系统。在进入各个操作区域需要严格单一流向进行，即试剂准备和贮存区→样品制备区→ＰＣＲ扩增区→扩增产物分析区，不得逆行。
（4）污染监测
设立阳性对照、阴性对照，进行重复试验，选择不相同区域的引物进行ＰＣＲ扩增等，做好污染监测，以便采取措施防止和消除污染。
（5）定期实验室清洁
配制含有效氯 0.5% 的消毒液对设备表面、台面、地面、物品表面、传递窗内及门窗进行擦拭，对设备内垃圾桶进行浸泡。
根据从上到下、从里到外的原则进行酒精对空喷洒。
酒精擦拭（75%）移液器、八连管离心机、混匀振荡器等小型设备。
纯化水对设备表面、台面、地面进行擦拭，对设备垃圾桶进行冲洗。
》》》》》文中图片引自 pixabay.com