HBV乙肝造模AAV实验技术服务

HBV 感染具有种属特异性，其宿主选择范围非常狭窄，现有HBV感染动物模型中最有效的仍是黑猩猩，但其属于濒危动物，来源有限，受到动物伦理限制而难以推广。在小动物模型中，树鼩可自然感染人HBV，但在感染率、感染维持时间、感染指标检测结果稳定性和重复性方面存在不足，导致结果可比性和重复性较差。因此，遗传背景均一的小鼠仍然是研究者进行HBV研究的最佳选择。

利用rAAV病毒载体携带1.3×HBV全长基因组，通过一次性尾静脉注射方式来制备HBV持续感染的小鼠动物模型，具有制备简单、成功率高、均一稳定、量效关系明显、适用范围广等优势，已被广泛应用于HBV的药物评价和疫苗筛选等领域。该模型可以大大缩短乙肝药物研发临床前动物实验阶段的准备时间，而且成本低廉，可以大大加快乙肝治疗方案和新药研究的进度。

操作要求

rAAV作为基因治疗载体的安全性在1994年被FDA认可，其生物安全性为一级（BSL-1），与质粒DNA的安全级别相同，建议使用BSL-2实验室和ClassⅡ生物安全柜。

保存要求

建议病毒保存在-80℃，使用时取出，放置在冰上操作，须在24小时内使用完毕。

建议对使用量提前进行预估，出货时按照预定的要求进行分装，避免收货后再次冻融分装影响滴度准确性。如需再次分装，推荐使用内壁硅化程度良好的PCR管，或者低蛋白结合率的病毒专用保存管。

如需稀释AAV-HBV, 请将病毒置于冰浴融解后，使用PBS 或者PBS / 0.001% F-68稀释；

AAV-HBV感染肝脏

值得注意的是，重组腺相关病毒（rAAV）已经被广泛应用于动物体内实验和细胞研究中。但对于体内试验，注射部位如何选择，注射多少病毒量，注射后多久检测等问题，因为研究领域、研究的动物不同，而很难有简单通用的注射方法，实验中还需要具体探索最佳条件。

AAV-HBV小鼠造模实验设计

由于模型小鼠存在个体差异和操作者手法不同等影响因素，强烈建议在正式实验之前，对AAV-HBV进行3~4个注射量的梯度测试，每只小鼠依次按最低要求递增。比如：1E+11GC; 2E+11GC; 3E+11GC 做3个梯度稀释

建议每只小鼠的注射剂量在3E+11GC时，造模效果可达到较理想的状态。