ChIP技术实验流程及方法

目前广泛使用的ChIP实验试剂盒，通常需要2-3天的时间完成一次完整的实验，简易流程如下：

　　第一天：

　　甲醛固定细胞→收集细胞，超声破碎或酶解法破碎细胞→加入目的蛋白的抗体，与超声后的靶蛋白-DNA复合物相互结合，过夜孵育;

　　第二~三天：

　　加入Protein A Agarose，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，并沉淀→对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合→洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物→解交联→纯化富集的DNA-片断→qPCR分析。在qPCR分析这一块，比较传统的做法是半定量-PCR。但是现在随着荧光定量PCR的普及，使用qPCR更能定量地反映实验结果。