PCR污染解决方法与技巧

生物实验，大多数实验检测都是微观的，基于细胞，分子，蛋白水平，而这些微观样本对外界环境的影响敏感，比如温度、ph值、酶解、损伤等，在我们尽力呵护样本的生存环境的同时，污染也是需要注意的头等大事，要坚决避免环境中的“杂质”的乱入，包括样本污染，试剂仪器交叉污染、产物气溶胶污染等对实验结果的影响。“易查不易察”，污染来的悄无声息，防不胜防，假阳性结果让无数生物学子抓狂和崩溃。小编今天就来扒一扒生物实验室污染之PCR实验污染你不知道的事。在众多的生物实验室，分子生物学检测方法如PCR因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用，不过正是由于它灵敏度高，微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性，所以对环境污染的控制也极为严格。面对众多的污染源，比如样本交叉污染、试剂仪器交叉污染、克隆质粒污染、PCR扩增产物污染、还有容易忽视的气溶胶污染。气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系，在空气与液体面摩擦时，比如在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个非常重要而被忽视的污染源。虽然这些污染对PCR实验结果的影响已经受到了广泛重视，多数实验室对污染控制都采取了各种办法，比如定期大扫除清理、划分操作区域、试剂分装、操作谨慎、重复实验、多角度验证结果。但是微量的核酸片段就能被扩增，所以对污染物的控制不仅仅是做到这些就能够杜绝和避免的，关键是需要从源头控制。目前多数生物试验室，分子实验每天都在大规模进行，污染源已经无处不在，特异性的，非特异性的，同源的，非同源的，广泛分布在样本容器、实验室台面，试剂溶液中、仪器表面内管附着等等，你以为普通的清理就能解决这些污染源吗？必须是不行的，实验室大拿们都为了清除这些污染源研究出好多种方法，整理跟大家共享。传统方式原理优势不足酒精擦拭将核酸沉淀，擦拭后保证污染表面污染得到一定程度缓解简单、方便、成本低不彻底（核酸片段本身没有变化，仍然存在导致气溶胶污染的可能性）、细小孔径器材无法清除修饰标记遗传物质，阻止聚合酶与核酸的结合，从而抑制DNA扩增效果相对好反应可逆、成本高、试剂可能具有不安全影响酶解酶可将长链的核酸分子降解成小片段速度快，效果相对较好降解的核酸中仍有大片段存在，具有完整的遗传信息，可通过PCR扩增出完整的片段、成本高高压变性高压可将核酸降解成20～30bp的小片段彻底，成本低仅适用于耐高压材料，更无法应用实验操作台和大型的实验设备紫外照射PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体，延伸终止方便，范围广，成本低仅对500bp以上长片段有效，对短片段效果不大，且并不是DNA链中所有嘧啶均能形成二聚体，且UV照射还可使二聚体断裂