AAV基因诱导表达载体是什么？

Tet-On基因诱导表达载体系统是在哺乳动物细胞中进行实时GOI表达的强大工具。我们的Tet-On基因诱导表达载体系统在无四环素及其类似物（多西环素）的情况下可以做到GOI几近完全沉默并且在加入四环素及其类似物（多西环素）的情况下快速响应实现GOI表达。这是通过tTS和rtTA蛋白响应四环素及其类似物（多西环素）的基因调控功能实现的。当不存在四环素及其类似物（如doxycycline）的情况下，目的基因几乎或完全沉默；当往体系中添加四环素或其他类似物（如doxycycline）时，目的基因得到快速高水平表达。四环素不存在的情况下时，衍生于TeR（Tet抑制蛋白）和KRAB-AB（Kid-1蛋白转录抑制结构域）的融合蛋白tTS结合TRE启动子，导致基因转录抑制。另一方面，四环素存在时，衍生于突变型Ter抑制蛋白和VP16蛋白（转录激活结构域）的融合蛋白rtTA结合TRE启动子，激活基因转录。

AAV诱导表达载体首先以质粒的方式构建并使用E. coli扩增，然后转染进入包装细胞。在包装过程中，位于两个反向重复序列（ITR）之间的DNA片段与由包装细胞表达的病毒蛋白进一步包装成病毒颗粒。位于两个ITR之间的四环素诱导基因表达盒包含两部分：一个四环素响应因子（TRE）启动子驱动的用户自定义GOI，以及一个一个广泛启动子或者组织特异性启动子驱动的tTS/rtTA调控蛋白。当病毒转导宿主细胞时，两个ITR区域之间的序列和其他病毒基因组分由此进入了靶细胞。GOI的表达可通过加入四环素启动。