大肠菌群的检测方法常见问题解答！
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常用标准
(1) GB/T 4789.3-2003 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定
(2) GB 4789.3-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数
(3) GB 4789.28-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求
(4) GB 4789.1-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则
(5) GB 4789.41-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 肠杆科检验
(6) GB/T 27405-2008 实验室质量控制规范 食品微生物检测
(7) GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区） 沉降菌的测试方法
常见问题及解答
1：食品中大肠菌群的检测有两个标准三种方法，该如何选择呢？
A：依据产品标准的项目单位
1.1、若单位为CFU/g，则选择GB 4789.3-2016第二法（平板计数法）
1.2、若单位为MPN/g，则选择GB 4789.3-2016第一法（MPN计数法）
1.3、若单位为MPN/100g，则选择GB/T 4789.3-2003。
2：MPN法3个适宜的连续稀释度该怎样选择？
A：依据产品标准的项目标准值
2.1、若标准值为＜3.0MPN/g，则选择0.1g、0.01g、0.001g三个稀释度。
2.2、若标准值为≤30MPN/100g，则选择1g、0.1g、0.01g三个稀释度。
样品采集
怎样采样，才能使样品具有代表性？
这里将样品分为两类：预包装食品和散装食品或现场制作食品
（1）、对于预包装食品
① 应采集相同批次、独立包装、适量件数的食品样品，每件样品的采样量应满足微生物项目检验的要求。
② 独立包装小于、等于1000g 的固态食品或小于、等于1000mL 的液态食品，取相同批次的包装。
③ 独立包装大于1000mL 的液态食品，应在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体，使其达到均质后采集适量样品，放入同一个无菌采样容器内作为一件食品样品；大于1000g 的固态食品，应用无菌采样器从同一包装的不同部位分别采取适量样品，放入同一个无菌采样容器内作为一件食品样品。
（2）、对于散装食品或现场制作食品
用无菌采样工具从 n 个不同部位现场采集样品，放入 n 个无菌采样容器内作为 n 件食品样品。每件样品的采样量应满足微生物项目检验单位的要求。
培养基制备过程容易出现问题解答
1、异常现象一：培养基不凝固
原因分析：
①制备过程中过度加热；
②低pH造成培养基酸解；
③称量不正确；
④琼脂未完全溶解；
⑤培养基成分未充分混匀。
2、异常现象二：pH不正确
原因分析：
①制备过程中过度加热；
②水质不佳；
③外部化学物质污染；
④测定pH时温度不正确；
⑤pH计未正确校准；
⑥脱水培养基质量差。
3、异常现象三：颜色异常
原因分析：
①制备过程中过度加热；
②水质不佳；
③pH不正确；
④外来污染；
⑤脱水培养基质量差。
4、异常现象四：产生沉淀
原因分析：
①制备过程中过度加热；
②水质不佳；
③脱水培养基质量差；
④pH计未正确控制。
5、异常现象五：培养基出现抑制/低的生长率
原因分析：
①制备过程中过度加热；
②脱水培养基质量差；
③水质不佳；
④使用成分不正确，如：成分称量不准，添加剂浓度不正确；
⑤制备容器或水中的有毒残留物。
6、异常现象六：选择性差
原因分析：
①制备过程中过度加热；
②脱水培养基质量差；
③配方使用不对；
④添加成分的加入不正确，例如加入添加成分时培养基过热或添加浓度错误；
⑤添加剂污染。
7、异常现象七：污染
原因分析：
①不适当的灭菌；
②无菌操作技术存在问题；
③添加剂污染。
实验过程
1、2016版平板法VRBA倾注完，待琼脂凝固后为什么需要加3-4mL的覆盖层？
A：因为大肠菌群是需氧及兼性厌氧的，再加一层琼脂相当于造就一个半厌氧环境，促进兼性厌氧菌的生长，同时抑制其他菌的生长。除此之外，还有防止菌落蔓延的作用，防止迁徙性菌落对菌落计数构成影响。例如一些变形杆菌就会有迁徙现象，从而导致菌落长成一片无法区分。在表面多覆盖一层培养基就可以避免这种情况的发生。
2、GB 4789.3-2016平板法验证菌落如何挑取？
A：分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落数。按比例挑取10个不同类型的典型和可疑菌落,少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落。假如在1:10的平板上可疑大肠菌群有10个，典型大肠菌群有6个。证实实验应该按照可疑跟典型5:3的比例进行挑取，移种于BGLB肉汤管内。
结果处理
按标准里的详细规定对大肠菌群进行计数。
注意：对于结果检出的平板或试管需要经过无害化处理（121℃灭菌30分钟）方能弃去，防止对环境造成污染。
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