IHC与PCR检测MSI的异同之差异篇
目前检测癌细胞中的微卫星不稳定时，既可以通过检测MMR基因缺失来确定是否发生MSI，如依赖于免疫组化技术的蛋白水平检测，也可以直接检测MSI的序列变化，如聚合酶链式反应(PCR)检测等的分子水平检测[1]。通过IHC检测MMR蛋白的表达与基于DNA分析检测MSI状态是评估相同生物学效应的不同检测方法[2-3]。检测4种MMR蛋白（MLH1、 MSH2、MSH6和PMS2）的表达与基于DNA的MSI检测的一致率>90%，具有很高的特异性和敏感性[4-7]。一些研究显示MMR免疫组化和MSI分子检测之间不一致情况大约在1%到10%之间[8-10]。
AnaVelasco等发起的一项覆盖44个临床中心，1301例结直肠癌FFPE组织样本的研究显示，Idylla™MSI与实验室常规IHC方法的一致率为96.39% (988/1025)，Idylla™MSI与实验室常规分子方法的一致率98.01%(789/805)。此外Idylla™MSI的失败率0.23% (3/1301)低于IHC的失败率4.37% (47/1075)和其它分子方法的失败率0.86% (7/812)[11]。Karen Zwaenepoel等的一项330例结直肠癌样本的研究显示，与1.2版Promega MSI分析系统相比,Idylla™MSI检测的总体一致性、灵敏度和特异性分别达到了99.7%、98.7%和100%。Promega MSI分析系统检测到7例样本无效，而Idylla™MSI检测系统只检测到2例样本无效。与IHC相比,Idylla™MSI检测的总体一致性、灵敏度和特异性分别为98.7%、 94.4%和100% [12]。
虽然分子检测MSI与IHC检测MMR具有很高的一致性，但仍然有少数的不一致现象，主要可能有以下原因：
1. IHC未能检测所有MMR基因变异。目前已发现人类MMR系统中含有9个错配修复基因（MLH1、PMS2、MSH2、MSH6、EPCAM、MLH3、PMS1、EXO1等）。IHC通常只检测了其中4种MMR基因（MLH1、MSH2、MSH6及PMS2）[13-14]。
2.IHC虽然阳性，但是MMR蛋白功能缺失。原因之一是错义突变导致的蛋白催化功能缺失但是保持抗原完整性。另一种IHC虽然阳性，但是MMR蛋白功能或活性缺陷的生物学原因之一是其它次要蛋白替代PMS2和MSH6缺失(MSH3替代MSH6, MLH3或PMS1替代PMS2)。因此强烈推荐同时或序贯检测四种抗体。约 10% MMR功能缺陷的CRC患者IHC 结果显示为阴性( 蛋白表达正常)[15]。
3.技术原因导致的假阴性结果。主要是由于组织固定不当等预分析问题。此外还能出现细胞质、点样或核周染色等异常染色。使用内部阳性对照，如正常粘膜、淋巴细胞或基质细胞是保证检测结果的重要条件[15]。
4.MMR判读经验对结果的影响。病理学IHC检测应强调标本处理的规范，采用机器( 自动化) 方法与人工判读相结合，并需有良好的质控和内参，其中主要是人工判读部分容易存在问题。浙江大学医学院附属第二医院袁瑛教授等将免疫组化和一代测序也做了方法比对，结果显示常规病理科医生报告得到的dMMR报告结果和一代测序结果的吻合率非常低，约为50%；而如果是高年资、经验丰富的病理科医生对免疫组化切片进行复核，并排除假阴性结果，与一代测序结果的吻合率则高达92%。所以，国内MSI检测共识中特别强调，如果采用免疫组化方法，读片医生的阳性判读经验是非常关键的问题，另外免疫组化切片预处理流程的标准化也值得重视[13、16]。
在日常临床实践中需要特别注意MMR或MSI错判导致免疫检查点抑制剂无效的情况。Romain Cohen等的一项研究发现，在38例MSI-H或dMMR的mCRC患者中，5例（13%）对免疫检查点抑制剂原发耐药。复查发现其中3例被错误诊断为MSI-H或dMMR。他们又分析了93例回顾性样本，发现其中9例（10%）被错误诊断为MSI-H或dMMR[18]。因此ESMO共识建议同时使用MMR-IHC和MSI-PCR评估转移性结直肠癌或者其它林奇综合征相关癌症的免疫检查点抑制剂治疗筛选[15]。
参考资料
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[13] 结直肠癌及其他相关实体瘤微卫星不稳定性检测中国专家共识(2019年）.
[14] Vilar , Gruber SB．Microsatellite instability in colorectal cancer: the stable evidence．Nat Rev Clin Oncol,2010,7(3):153-162．
[15] Luchini C, et al. ESMO recommendations onmicrosatellite instability testing for immunotherapy in cancer, and itsrelationship with PD-1/PD-L1 expression and tumour mutational burden: asystematic review-based approach. Ann Oncol. 2019 Aug 1;30(8):1232-1243
[16] https://mp.weixin.qq.com/s/u9U7IfA74K9Ihvqtc7NjrQ
[17] https://mp.weixin.qq.com/s/XKvTmc4RmMqlehtBgIeABw
[18] Cohen R, et al. Association of primaryresistance toimmune checkpoint inhibitors in metastaticcolorectal cancer with misdiagnosis of microsatellite instability or mismatchrepair deficiency status. JAMA Oncol 2018.
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