为了进行任何基因克隆实验，我们必须先分离质粒？

分离质粒DNA的纯净形式是分子克隆实验中的关键步骤之一。 为此，首先，使用标准细菌培养程序培养含有质粒DNA的细菌。 使用碱性裂解和去污剂方法分离质粒。SDS通常用于此目的。

质粒DNA的纯化

可以使用标准的苯酚-氯仿方法来分离和纯化质粒DNA，但是由于实验的毒性因此不建议使用。 取而代之的是使用质粒DNA纯化柱法，它具有更高的产量和更高的纯度。 除此之外，最常见的乙醇沉淀法也可用于纯化质粒DNA。

构建质粒DNA

为了构建质粒DNA，首先，我们要从基因组中分离出我们感兴趣的DNA。 使用限制酶切消化方法，然后进行PCR扩增，可以生成目标基因的多个副本。

现在，使用限制性核酸内切酶消化质粒DNA，该酶会产生与我们感兴趣的基因相同的粘性末端。 完成后，使用连接方法将启动子位点（用于执行复制）与目标基因一起插入质粒。

质粒构建过程完成后，即可扩增质粒DNA或将其直接插入细菌宿主中。

基因转移的方法很多，电泳，超声处理，脂质体介导的基因转移和病毒载体介导的基因转移就是其中一些。 插入后，质粒DNA整合到我们的基因组中并复制。