一文详解6种粪便检查技术
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大多数宠物主人都担心自己养的小猫和小狗体内有寄生虫,他们希望兽医们能够使用合适的诊断技术和治疗方案。因为许多宠物的寄生虫是人畜共患病,兽医和临床人员必须跟上最新最好的诊断技术。
为了确保宠物的健康和福祉,减少致人畜共患病的寄生虫潜在的传播机会,粪便检查寄生虫卵和卵囊是很重要的。粪检的方法和程序有很多种,各有各的优点及局限性。
本文回顾了最常用的若干种粪便检测技术。粪检结果的可靠性取决于步骤正确,样本量适当,检验人员技术素养过关等。
01
直接涂片
适应症
感染原生动物寄生虫的活动滋养体的恢复期,如贾第鞭毛虫和三毛滴虫幼虫。
优点
能够对粪便中由于高渗悬浮溶液浸润而变形死亡的活动滋养体进行快速筛查。
缺点
粪便量过少会导致检查的敏感度下降,并且对区分鉴别滋养体造成困难。
结果可靠性
取决于个人的技术和经验,以及样本中滋养体的存在和活力。
02
粪便离心漂浮法
适应症
作为常规健康检查的一部分或者当临床症状增加,怀疑为寄生虫感染时,粪便检查回收虫卵可为诊断寄生虫感染提供依据。
优点
一些研究和文献证明,相比于被动的漂浮法,粪便离心浮选明显可回收更多的虫卵及卵囊,假阴性结果出现更少。虽然研究人员通过离心方法未找到更多阳性样本,但数据显示,离心的方法回收的虫卵是被动漂浮法的1.5~4倍。
在兽医学中,盐溶液(NaCl, NaNO3, ZnSO4) 已被广泛应用于粪便的浮选。主要是因为这些试剂在市场上容易买到,并且硫酸锌被认为是贾第鞭毛虫包囊的最佳回收溶液。
离心粪便浮选常使用现在市售的Sheather's蔗糖溶液(比重1.27)而不是标准的盐溶液(如硫酸锌、硝酸钠;比重1.18–1.2),因其可以回收更多平均比重较重的虫卵,如猪带绦虫(图1)、泡翼线虫(图2)。硝酸钠溶液具有较高的比重,但涂片必须在溶液结晶前快速完成检查。
图1绦虫卵,40mcm
图2泡翼线虫,45×30 mcm
缺点
要求使用的离心机是旋转或固定头转子。试管装满糖溶液离心后会在离心机中留下粘性残留物。贾第鞭毛虫包囊可能扭曲或者被Sheather's蔗糖溶液破坏。
结果可信度
与检测时是否严格遵守正确的程序、个人的技能和经验有直接关系。合格的技术人员使用良好的技术所产生的结果是非常可靠的。已发表的文献表明,私人诊所利用Sheather's蔗糖溶液离心技术是粪便常规浮选的最佳方法,在目前被认为是金标准。
03
被动粪检漂浮法
适应症
在粪便中找出寄生虫以判断病程阶段,或者由于临床表现而高度怀疑寄生虫感染时,可作为寄生虫感染常规健康筛查的一部分。
优点
简单易行,尤其在使用商业设备操作时,其耗费通常要比离心技术便宜。当离心机不能进行粪便浮选的时候,被动浮选技术可以代替。
缺点
比离心技术效率低,回收的虫卵较少,假阴性结果较多。
结果可信度
如果幼犬感染蛔虫未能识别出来,并且其生活环境被虫卵污染,那么这种诊断效率的降低值得重视。
04
贝尔曼法
适应证
用于回收并诊断肠道或者肺部寄生虫感染的幼虫,而不是虫卵。
优点
允许回收幼虫,否则将被浮选溶液破坏。
缺点
过程漫长,至少需要4小时;设备在普通兽医诊所不常用;并且,如果粪便不新鲜或者被土壤污染,那么就需要区分幼虫来源,是在检查前就已是幼虫,还是钩虫或者圆线虫的虫卵孵化而来,又或者来自泥土。
结果可信度
与其他粪检技术一样,结果可靠性与严格遵守正确程序和检查者的技能和经验直接相关。
05
沉淀法
适应症
主要用于鉴别因比重较高或者有盖(如吸虫及假叶绦虫)导致悬浮不佳的体内寄生虫虫卵。
优点
能回收非粪便浮选中的寄生虫卵,如吸虫类虫卵(例如图3中的重翼吸虫卵)、肺吸虫及异毕吸虫(图4)。
图3 重翼吸虫卵,100×68 mcm
图4 异比吸虫卵,88×75 mcm
缺点
过程比粪便浮选更复杂;检查载玻片需要时间。私人兽医诊所不常用,因此人员很可能没有受过训练,因而不能完成步骤。
结果可信度
与其他粪检技术一样,其结果可信度与严格遵守正确程序和检查者的技能和经验直接相关。
06
贾第鞭毛虫抗原检测
适应症
用于识别狗和猫身上与贾第虫物种相关的临床疾病。用市售的兽医临床试剂(SNAP贾第虫试验;IDEXX公司)检测贾第鞭毛虫抗原。
优点
可快速检测动物的贾第鞭毛虫抗原以辅助诊断临床贾第虫病。
缺点
出现假阴性结果。当包囊间歇剥落,及粪便中抗原不均匀分布时可能存在假阴性。
结果可信度
如果样品中出现包囊,那么几乎不会出现假阴性,结果高度可信。在没有临床症状的成年狗和猫身上检测出贾第鞭毛虫包囊抗原,可能是由于大量环境污染或它们是慢性携带者造成的。
+
总结
直接涂片法
将少量粪便样本涂到载玻片上,用生理盐水抹成薄薄的一层,涂完后以可透过载玻片看清下面的报纸为宜。盖上盖玻片开始镜检。
贝尔曼法
贝尔曼法的原理是幼虫从粪便进入水里后的主动迁移或运动,但幼虫在水中尚无法自由游动,所以它们会下沉到容器底部,从而我们可搜集进行检查。
漂浮法
漂浮法的原理是利用虫卵、粪便杂物和漂浮液三者比重不同来区分。也就是说漂浮液的比重必须大于虫卵的比重。鉴于大部分虫卵的比重在1.05-1.23,所以漂浮液的比重至少是1.24。这种方法还需要考虑粪便杂物的重量。实际操作中要注意漂浮液的密度和漂浮时间是否充足。
沉淀法
沉淀法可用于检查位于容器底部的虫体残骸和虫卵。