敲除筛选技术实验流程

CRISPR/Cas9系统可以通过sgRNA高效、特异地靶向特定DNA序列，造成双链断裂，引入Indel(short insert/deletion)突变，从而导致目的基因的功能缺失。由于sgRNA序列较短，因此较容易获得一个能够覆盖全基因组范围的寡聚核酸序列文库，进而建立sgRNA文库;利用慢病毒作为载体，可获得每个细胞单个基因敲除的细胞文库;再通过药物或者表型筛选获得目的细胞;最后进行高通量测序，可以检测出相应的敲除基因。与传统的RNAi全基因组筛选相比, CRISPR/Cas9系统在敲除效率和特异性方面具有显著优势。利用CRISPR/Cas9系统对细胞进行全基因组范围内的功能缺失策略进行高通量筛选已成为越来越多研究人员寻找与表型相关基因靶点的重要方法。

　　技术特点

　　通过慢病毒形式的文库可以提高敲除效率;

　　包含123,411条sgRNA，能够覆盖19,050个基因及1864个microRNA;

　　能够提供1*108TU的病毒颗粒;

　　采用第三代慢病毒包装系统，双病毒方案，有效提高病毒感染效率。

　　适用范围

　　寻找潜在的药物靶点;

　　筛选药物活性、药物敏感性靶标基因;

　　发现潜在的联合用药靶点或者相关信号通路;

　　细胞对致死致病源感染的敏感基因;

　　肿瘤细胞增殖关键基因。

　　实验流程

　　载体信息