重组质粒构建流程

重组质粒构建流程

1.基因的获得: shRNA寡核苷酸序列的设计和合成(将正确序列克隆入载体中，退火形成双链，PCR扩增)

2.回收

回收试剂盒

3．连接

4. 转化

5．抽提质粒（碱裂解法提取质粒DNA)

6．重组质粒克隆的鉴定

1）通过PCR方法鉴定：以重组质粒为模板，PCR产物的特异性引物或载体的通用引物进行PCR扩增后电泳鉴定。

2）酶切鉴定：双酶切鉴定时只要出现质粒条带和你的插入片段的目的条带就行了

7. 质粒DNA的含量及纯度鉴定

8.浓度测定仪及琼脂糖凝胶检测