TRIS在植物蛋白质提取中的应用

TRIS全称三羟甲基氨基甲烷，属于一种常见的生物缓冲剂。生物缓冲液常用于生物化学研究实验当中，具有极为重要的意义，是一类能够抵制外界少量强酸和强碱的影响，维持PH值基本不变的调节液。TRIS不仅被广泛用于核酸和蛋白质的溶剂，蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一，还可参与生产多种化工、农药、医药产品，是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的重要中间物。另外TRIS还能在植物蛋白质提取中的应用，有多少人知道呢？

蛋白质组学即从蛋白质组的水平进一步认识生命活动的机理和疾病发生的分子机制，而在蛋白质组学的研究中，蛋白质的提取是最基础也最关键的环节之一，TRIS是植物蛋白质提取中常用的试剂，方法包括TRIS-HCl法、酚法、TRIS-丙酮-酚法。本文将对这几种方法进行分析总结。

TRIS-HCl法：

TRIS-HCl法提取的蛋白图谱效果比用TCA丙酮法提取的效果好。TCA丙酮法所提取蛋白在小分子量区域分布不均匀，蛋白点不清晰，水平条纹与竖直条纹较为严重，而TRIS-HCl法克服了上述缺点，并分离出TCA丙酮法所不易分离出的酸性蛋白，除分离到较多的中等分子量的蛋白质外，还能得到很多的高分子量和低分子量蛋白质。

酚法：

酚法利用了TRIS-饱和酚的特性：酚是蛋白质的良好溶剂，在样品制备过程中，蛋白质和脂类溶于酚相，盐、核酸、多酚和多糖等可溶性物质进入水相；通过增加离心力和离心时间，可以尽可能地把密度大的糖离至上清液的上层；酚相中的蛋白质通过乙酸铵的甲醇溶液沉淀，再用冷丙酮多次清洗蛋白，可以去除色素和铵离子等杂质。

TRIS-丙酮-酚法：

将TCA丙酮法与酚法结合后用于提取蛋白，融合了TCA丙酮沉淀法和酚法的优点。先用含有乙酸铵的甲醇溶液清洗残留的TCA并提升溶液的pH到7.0以上，再使用酚和SDS的混合物来溶解蛋白。酚-SDS联合提取比酚、SDS缓冲液单独提取更有效。TRIS-丙酮-酚法在很多植物的蛋白提取上都取得了非常好的效果，而且电泳图谱背景和条带都很清晰，蛋白质点多，可广泛应用于植物的叶片和果实中蛋白质的提取。

对于植物蛋白的提取，不仅样品多样，而且每种植物所含有的成分也不同，其中的干扰因素也多，所以没有一种方法可以适用于各种样品。在实验中，首先要明确目的，是获得一种目标蛋白还是获得所有蛋白，然后再根据样品特点来选择提取方法，进行摸索优化。