微生物的培养与应用（视频课 知识点 练习）
一、名师视频课
1.微生物的种类、所需营养、培养基的种类↓
主讲：黄森
2.微生物纯培养技术↓
主讲：黄森
3.微生物的分离与计数↓
主讲：林祖荣
二、知识点
1.识记微生物的培养、分离与计数
2.微生物的培养和纯化
(1)为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培养基在适宜条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成。
(2)观察菌落需用固体培养基，因此培养基要添加琼脂。
(3)倒平板的温度一般在50 ℃左右较为适宜，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(4)平板需倒置，这样既可减少培养基表面的水分挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。
(5)平板划线法只适用于微生物的提纯，不适合进行计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。
(6)利用稀释涂布平板法的计算公式估算水样中的活菌数：(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
(7)菌种可采用甘油管藏法长期保存。
三、练习
1.回答下列与细菌培养相关的问题。
(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨” “葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是___________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上______(填“能够”或“不能”)生长，原因是_________________________。
(2)用平板培养细菌时一般需要将平板______(填“倒置”或“正置”)。
(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是________________________________。
(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过_____处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
答案
答案：
（1）蛋白胨 不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同 能够 硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源
（2）倒置
（3）在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征
（4）灭菌
解析：（1）细菌培养时常用牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏能提供碳源、氮源、磷酸盐、维生素，蛋白胨能提供碳源、氮源、维生素，而葡萄糖不能提供氮源，NaNO3不能为微生物提供碳源。不同细菌生长繁殖所需要的最适pH是不同的，应该根据培养细菌的不同来调节培养基的pH。硝化细菌是化能自养型细菌，可以空气中的CO2为碳源，因此在没有碳源的培养基上能够生长。
（2）在平板培养基上培养细菌时，一般需将平板倒置，这样可以防止皿盖上的水珠落入培养基。
（3）不同种类的细菌所形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定的特征，不同种细菌在一定培养条件下表现出各自稳定的菌落特征，可以作为菌种鉴定的重要依据。
（4）使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，以免污染环境。
2.已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。
Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5 g/L)。
Ⅱ号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(15 g/L)。
Ⅲ号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(45 g/L)。
回答下列问题：
(1)在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是_______________。Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是____。
(2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会_____，其原因是__________________。
(3)Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是_______________。
(4)假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供_____和___________________。
答案
答案：
(1) 牛肉膏、蛋白胨 X
(2) 下降 不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖
(3) 稀释涂布平板法
(4) 能量 合成其他物质的原料
解析：
（1）牛肉膏蛋白胨培养基中，牛肉膏、蛋白胨为微生物生长提供了氮源，而Ⅱ号、Ⅲ号培养基中除X外的其他物质均不含碳，所以能为微生物提供碳源的有机物是X。
（2）因为Ⅱ号培养基中碳源只有X，属于选择培养基，只有能降解X的细菌才能增殖，而不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖。
（3）要对菌落进行计数，应采用稀释涂布平板法进行接种。
（4）在有氧条件下，丙酮酸参与细菌的有氧呼吸，可以为该菌的生长提供能量和合成其他物质的原料。
甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133.
乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124.
有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是：____________。
答案
答案：
（1）细菌 选择
（2）碳源、无机盐 蛋白质、核酸
（3）碘液 淀粉遇碘显蓝色，产淀粉酶菌落周围淀粉被水解，形成透明圈。
（4）乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差。
解析：（1）M培养基着用于真菌的筛选，抗生素能够杀菌，因此培养基中应加入链霉素以抑制细菌的生长，加入了链霉素的培养基属于选择培养基。 （2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，包括水、无机盐、碳源、氮源等。生物大分子包括蛋白质、核酸、多糖，由于糖类的元素组成中只有C、H、O，因此氮源进入细胞后可参与蛋白质、核酸等的合成。 （3）淀粉可以用碘液鉴定产生蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈，因此可通过加入显色剂选出能产淀粉酶的微生物。 （4）乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差，因此其可信度差。
答案
答案：
（1）麦芽汁琼脂 高压蒸汽 由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体
（2）菌体快速增殖 乙醇产生
（3）酵母菌分解葡萄糖会产生CO2，CO2使面包松软
解析：（1）酵母菌喜欢糖，因此分离培养酵母菌通常使用麦芽汁琼脂培养基，培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。菌落是由一个细菌或真菌在适宜的培养基上繁殖后形成的肉眼可见的集合体。（2）酵母菌属于兼性厌氧型生物，在有氧条件下能够进行有氧呼吸并大量繁殖，在无氧条件下进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。（3）制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，这是由于酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖，产生二氧化碳，二氧化碳是气体，遇热膨胀而形成小孔，使得馒头或面包松软多孔。
答案
答案：
（1） 脲酶
分解尿素的细菌是异养生物，不能利用 CO 2 来合成有机物
为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料
（2） 尿素
其他两组都含有 NH 4 NO 3 ，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用 NH 4 NO 3 ，不能起到筛选作用
（3） 为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH 稳定