circMTO1吸附miR-9参与肝癌发展
样本来源
289例HCC和癌旁样本(7对样本用于芯片检测)
技术手段
circRNA芯片、circRIP(circRNA pull down)、FISH 、IHC、qPCR
为了进一步验证,研究者在261例HCC患者的样本中检测其表达量,发现circMTO1在87.4%
(228例)的样本都是低表达的。
收集116例HCC患者的生存期数据,通过在组织芯片上做原位杂交(ISH),发现circMTO1在这些样
本中依然是显著下调,并且circMTO1的下调与HCC患者的不良预后显著相关
通过MiRanda 预测,有99个miRNA可能是circMTO1的靶标。利用RNA in vivo precipitation(RIP)
检测到20个miRNA。其中miR-9与circMTO1共特异性富集。通过FISH发现circMTO1与miR-9共定位
于胞浆中,以上的实验结果表明,circMTO1与miR-9在胞浆中结合。
细胞实验表明:HepG2和 SMMC-7721细胞中,沉默circMTO1表达会促进细胞的增殖及其迁移并抑制
凋亡;QGY-7701和SK-Hep1 HCC细胞中过表达circMTO1则会促使细胞凋亡;沉默circMTO1或者过表
达miR-9,都会使p21的mRNA和蛋白表达水平降低,而过表达circMTO1则会其相反的结果;抑制miR-9
的表达可以明显减弱在circMTO1表达下调时介导的对p21蛋白及其mRNA水平的表达抑制效果。也可以阻
断circMTO1沉默介导的细胞增殖和抑制凋亡的作用。
成瘤实验结果表明:皮下移植人类HCC组织构建HCC裸鼠移植瘤动物模型(SMMC-LTNM);circMTO1 沉默
(siRNA)两周后,小鼠的肿瘤生长速度明显加快,血清AFP升高;体内敲低(knock down) circMTO1后,
p21和下游的CDK2表达被抑制,细胞迁移和扩散的标记物MMP2和PCNA表达上调。