外泌体特异性包裹蛋白CD-UPRT结合5-氟胞嘧啶靶向治疗癌症

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Title 文章标题：

Genetically Engineered Microvesicles Carrying Suicide mRNA/Protein Inhibit Schwannoma Tumor Growth

Author 作者：

Arda Mizrak 等

Highlight文章亮点：

特异性地使外泌体包裹目的蛋白/mRNA，使得药物可靶向作用癌细胞。

Backgroud背景需知：

Structure文章思路：

简单来说，这篇文章就是将CD和UPRT特异性包入Exosome中，将改造过的Exosome处理坐骨神经癌细胞后尾静脉注射裸鼠，并在小鼠腹腔注射prodrug：5-FC，5-FC就会导致被特异性表达CD和UPRT的癌细胞凋亡，从而抑制癌症产生。

 Results实验结果

1.  Exosome内部包裹了CD和UPRT的蛋白/mRNA

要实现文章的构想，首先要保证可以使Exosome特异性地包裹CD和UPRT。 为此，作者构建pCMV-CD-UPRT-eGFP质粒并转染入HEK-293细胞中，收集上清的Exosome，通过WB和qPCR的方式证明Exosome内部包裹了CD和UPRT的蛋白/mRNA，而不是实验设计问题导致Exosome外部的粘连。

2. 包裹了CD和UPRT的Exosome处理后，可以促进HEI-193（immortalized human NF2 schwannoma cell）和其他癌细胞U87、SF443死亡

3. 裸鼠实验证明，5-FC配合包裹了CD和UPRT的Exosome可以特异性杀灭癌细胞。

疑问：

DC（Different centrigugation）纯化出来的100nm-150nm Exosome，相对于蔗糖梯度离心来的50-60nm Exosome，相对于传统的Exosome定义的30-100nm，偏大，而本文中DC方法得出的Exosome效果更佳。

Takehome Tip：

• 特异性使Exosome包裹目的蛋白，实现靶向治疗的新途径；

• 去除Exosome粘连的DNA的影响，做出更准的实验的protocol。

Protocol： HEK-293细胞转染目的基因，收集上清，300g、16,000g梯度离心去细胞碎片，0.22um滤膜过滤，110,000g离心得到Exosome，最后用DNAse I处理即可。