AAV-HBV转染小鼠模型构建方法

2001年，Sprinzl等^[29]开发了腺病毒载体携带1.3倍的鸭HBV基因组(Ad-DHBV)，经尾静脉注射进入小鼠体内的方法。采用类似的方法，von Freyend等^[30]将含有1.3倍HBV基因组的腺病毒载体(Ad-HBV)注射到C57BL/6小鼠体内，在小鼠肝脏中检测到3个月以上的HBV转录产物。由于腺病毒载体很大，同时编码一些非HBV病毒产物，这些产物也可能诱导免疫反应来清除HBV^[31]。

肝细胞靶向AAV载体具有低免疫原性的特点，将AAV-HBV通过小鼠尾静脉注射，成功建立了AAV-HBV小鼠模型^[32-33]。这类模型可以持续产生HBV病毒颗粒和HBV抗原且1年以上无血清转化，重现了临床CHB患者的部分免疫学特征。因而，AAV-HBV模型也被用于评估新的基于免疫的疗法和抗病毒治疗^[34]。目前常用的rAAV8-1.3HBV病毒载体，经尾静脉注射到野生C57BL/6小鼠体内，其表达水平随重组病毒注射剂量的增加而升高，高剂量注射时可造成超过40%的肝细胞感染HBV，血清中HBV DNA可达105 IU/ml。但要注意不同小鼠品系HBV感染的表型存在差别。

2017年Lucifora等^[35]报道通过Southern印迹分析可检测到AAV-HBV中存在cccDNA，然而这些cccDNA，是不是通过小鼠肝细胞中的rcDNA前体产生的仍不清楚，目前也无新的研究报道。另外在这些模型中，HBV的复制不是由cccDNA直接驱动的，而且重组AAV基因组进入体内后，一部分可以形成大的多聚体并整合到宿主基因组中，从而使得这些模型与cccDNA的相关性降低^[36]。尽管如此，AAV-HBV模型仍是用于评估免疫疗法和抗病毒治疗的主要模型。