胎牛血清选择及使用注意事项

一、如何挑选优质胎牛血清

优质的胎牛血清是实验的成功的前提是所有实验人做细胞培养的共识，如何挑选优质的胎牛血清，可以从以下几个方面着手。

1.外观

好的血清应是透明清亮，土黄色或棕黄色，无沉淀或极少沉淀，比较粘稠。如发现血清浑浊，不透明，含许多沉淀物，说明血清污染或血清中的蛋白质变性；若棕红色，说明血清中的血红蛋白含量太高，有溶血现象。

2、总蛋白含量

胎牛血清一般范围是30-40mg/ml，数值偏高，说明采血的牛龄偏大，不是胎牛；数值偏低，表明血清可能掺水了。

3、血红蛋白

标准为不高于20mg/dl，颜色越红，数值越高；反之，数值越低。

4、pH

国产血清，大多高于7.5，进口胎牛血清，大多低于7.5，具体原因未知，可能和牛龄有关，这也能用来初步鉴别血清的来源。

5、微生物

包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性种类病毒等。随着国内血清厂家生产条件的改善提高，细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能100%控制，支原体经过0.1μm过滤，大多也能清除。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的，主要是生产环境过程中带入，又无法过滤，很难完全清除，但对血清质量影响不大。病原性种类病毒，特别是BVDV，在国产血清中几乎90%以上都存在，这类微生物是影响国产血清质量的重要因素之一，而进口胎牛血清相对国产血清而言，检出率不高。

6、免疫球蛋白

国产血清的只是定性检测，结果也很不准确，进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能完全体现出采血的时的牛龄情况，国产血清，基本都是新生牛的，血清中容易产生IgM，IgG的含量也偏高，进口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也较低。

7、抗生素含量

此外，抗生素的使用也是要考虑在内的。国内外的血清，都不对抗生素进行测试（无四环素胎牛血清除外）。其中，由于国外抗生素使用较为严格，用量有限，同时每头奶牛的产品包括血清都可以追溯源头，所以国外胎牛血清不含抗生素或者含量极低。但是国内由于抗生素使用普遍，血清中残留量很高，导致国产血清质量很差，不利于细胞培养。

二、如何提升胎牛血清使用效果

胎牛血清是细胞培养重要的培养基且不可替代，它是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段，血中含有丰富的生长发育因子，非常适合各种细胞的培养。因此，如何在使用过程中保护这些因子的活性，达到完美的细胞培养效果，就需要正确地使用胎牛血清。

正确地使用胎牛血清可分为以下四个方面：

1. 正确储存，避免重复冻融

1) 血清在-20°C冻存。

2) 血清避免重复多次冻融，以免降低因子活性。如一次用不完，应进行分装。

3) 血清和培养基应尽可能“现用现配”，配好的培养液，应于一周内用完。

4)血清避免在4°C或更高温度静置过久，否则会破坏血清中有效活性成分，影响血清品质。

2. 正确的融化国际上流行的【血清融化三步法】可有效地保存血清中因子的活性，不会产生沉淀，同时能缩短血清融化时间。具体如下：

3. 关于胎牛血清的灭活

真正的胎牛血清因为胎牛没有形成有效补体，如果针对补体灭活的话，就不需要。其他情况根据实验设计来决定。

4. 胎牛血清的浓度

胎牛血清通常是以2%～20%的比例加到基础培养基中，混合后配成完全培养基。具体合适浓度需要用户根据自己的实验来确定，以既保证培养的效果，又避免血清的浪费。