基因敲除/敲入小鼠繁育方案

重点：杂合子与杂合子交配，获得纯合子+/- × +/- → -/-

对于采用 ES细胞打靶途径获得的基因敲除小鼠，在 Flp 重组酶去除 Neo 抗性基因以后，可以通过 KO 杂合子（+/-）之间相互交配的方式获得1/4KO 纯合子小鼠（-/-）、1/2 KO 杂合子小鼠（+/-）以及 1/4同窝野生型对照小鼠（WT）。繁育流程如下图所示：

该路径同样也适用于基因敲入小鼠。

需要指出的是，对于利用 CRISPR/Cas9 介导的 NHEJ 途径获得的 KO 小鼠，情况有所不同，方案类似于转基因小鼠的繁育。由于 NHEJ DNA修复的结果是随机发生的，所以每一只 KO Founder 小鼠、甚至一只 Founder 中每个细胞的基因型都可能是不同的。因此，KO Founder 要与野生型小鼠（比如：C57BL/6J）交配，获得基因型明确的 F1子代 KO 杂合子（+/-）小鼠。随后，才能进行杂合子小鼠的相互交配。

注意事项:

不同的 KO Founder 之间不能相互交配。

不同的 KO Founder 的子代之间也不建议相互交配。